[发明专利]用于检测水不混溶性化合物的微生物生成的方法和组合物

权利要求书

1.一种在溶液中检测自多个细胞重组生成的水不混溶性化合物（WIC）的方法，该方法包括：

(a)使溶液与直接结合WIC的荧光染料接触，其中所述溶液包含多个重组生成WIC的细胞；并

(b)在适合于选择性检测结合至重组生成的WIC的荧光染料的光谱条件下检测荧光染料。

2.权利要求1的方法，其中所述WIC是自重组生成所述WIC的所述细胞分泌的。

3.权利要求1或2的方法，其中所述荧光染料是尼罗红。

4.权利要求1或2的方法，其中所述荧光染料是BODIPY493/503或BODIPY505/515。

5.权利要求1-4任一项的方法，其中所述包含多个细胞的溶液包含在多孔细胞培养板的孔中。

6.权利要求1-5任一项的方法，其中在所述检测之前将所述细胞培养至少12小时的时段。

7.权利要求1-6任一项的方法，其进一步包括测定WIC:细胞生物质比率的步骤。

8.权利要求7的方法，其中所述细胞生物质通过包括检测所述多个细胞的自身荧光的方法来测定。

9.权利要求8的方法，其中检测所述多个细胞的自身荧光包括在不检测来自结合至WIC的荧光染料的荧光的光谱条件下检测自身荧光。

10.权利要求9的方法，其中以激发波长330至350nm和发射波长470至510nm检测所述自身荧光。

11.权利要求7的方法，其中所述荧光染料是尼罗红，且测定WIC:细胞生物质比率包括测定绿色对红色荧光的比率。

12.权利要求1-11任一项的方法，其中所述光谱条件包括在如下选择的激发波长检测荧光染料：

(a)使荧光染料与第一多个细胞群体和第二多个细胞群体接触，其中所述第一和第二多个细胞群体的细胞与权利要求1的细胞属于相同细胞类型，其中每个多个细胞群体包含具有细胞密度x的细胞群体和具有细胞密度5x的细胞群体，其中所述第一多个细胞群体的每个细胞群体包含WIC，且所述第二多个细胞群体的细胞群体不包含WIC；

(b)分别测定所述第一多个细胞群体和所述第二多个细胞群体的激发光谱；并

(c)选择激发波长，其中：

(i)具有相同细胞密度的来自所述第一多个细胞群体的细胞群体和来自所述第二多个细胞群体的细胞群体之间的荧光差异为至少80%；且

(ii)来自所述第二多个细胞群体、具有细胞密度x和细胞密度5x的细胞群体之间的荧光差异不超过250%。

13.权利要求12的方法，其中将步骤(b)的所述激发光谱的发射波长固定于550nm。

14.权利要求1-13任一项的方法，其中所述光谱条件包括在如下选择的发射波长检测荧光染料：

(a)使荧光染料与第一多个细胞群体和第二多个细胞群体接触，其中所述第一和第二多个细胞群体的细胞与权利要求1的细胞属于相同细胞类型，其中每个多个细胞群体包含具有细胞密度x的细胞群体和具有细胞密度5x的细胞群体，其中所述第一多个细胞群体的每个细胞群体包含WIC，且所述第二多个细胞群体的细胞群体不包含WIC；

(b)分别测定所述第一多个细胞群体和所述第二多个细胞群体的发射光谱；并

(c)选择发射波长，其中：

(i)具有相同细胞密度的来自所述第一多个细胞群体的细胞群体和来自所述第二多个细胞群体的细胞群体之间的荧光差异为至少80%；且

(ii)来自所述第二多个细胞群体、具有细胞密度x和细胞密度5x的细胞群体之间的荧光差异不超过250%。

15.权利要求14的方法，其中将步骤(b)的所述发射光谱的激发波长固定于290nm。

16.权利要求12-14任一项的方法，其中所述第一多个细胞群体的细胞群体包含至少2g/L WIC。

17.权利要求1-16任一项的方法，其中所述重组生成的水不混溶性化合物是类异戊二烯（isoprenoid）。

18.权利要求1-17任一项的方法，其中所述重组生成的水不混溶性化合物是萜、C5类异戊二烯、C10类异戊二烯或C15类异戊二烯。