[发明专利]通过离子型表面活性剂选择性裂解细胞

权利要求书

1.一种用于选择性裂解在含有或疑似含有微生物的样品内的真核细胞的方法，所述方法包括以下步骤：

-a）提供一种含有或疑似含有微生物的具有真核细胞的样品，

-b）向所述样品添加一种离子型表面活性剂和一种缓冲剂，以获得具有大约9.0或更高的pH的溶液，

-c）孵育所述溶液持续充分长到足以裂解这些真核细胞的时间段。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述样品是一种哺乳动物血样。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述血样是全血。

4.根据权利要求1到3中任一项所述的方法，其中所述微生物选自下组，该组由以下各项组成：细菌和真菌。

5.根据权利要求1到4中任一项所述的方法，其中所述孵育步骤c）进行30秒到10分钟。

6.根据权利要求1到5中任一项所述的方法，其中所添加洗涤剂和所添加缓冲剂的体积与样品体积之间的比率在2/1与1/10之间。

7.根据权利要求1到6中任一项所述的方法，其中该离子洗涤剂是是以0.1%到5%（w/v%或v/v%）浓度在溶液中存在。

8.根据权利要求1到7中任一项所述的方法，其中该离子型表面活性剂选自下组，该组由以下各项组成：阴离子型表面活性剂和阳离子型表面活性剂，该阴离子型表面活性剂优选地选自下组，该组由以下各项组成：烷基硫酸盐、烷基醚硫酸盐、多库酯盐、磺酸盐氟表面活性剂、烷基苯磺酸盐、烷基芳基醚磷酸盐、烷基醚磷酸盐、烷基羧酸盐以及羧酸盐氟表面活性剂，更优选地选自下组，该组由以下各项组成：十二烷基硫酸铵、十二烷基硫酸钠（SDS）、脱氧胆酸钠、正十二烷基苯磺酸钠、十二烷基醚硫酸钠（SLES）、肉豆蔻醇聚醚硫酸钠、琥珀酸二异辛酯磺酸钠、全氟辛烷磺酸盐（PFOS）、全氟丁烷磺酸盐、硬脂酸钠、月桂酰肌氨酸钠、全氟壬酸盐以及全氟辛酸盐（PFOA或PFO），并且该阳离子型表面活性剂优选地选自下组，该组由以下各项组成：十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、十六烷基三甲基氯化铵（CTAC）、氯化十六烷基吡啶（CPC）、牛油胺聚氧乙烯醚（POEA）、苯扎氯铵（BAC）、苄索氯铵（BZT）、5-溴-5-硝基-1,3-二噁烷、双十八烷基二甲基氯化铵以及双十八烷基二甲基溴化铵（DODAB）。

9.根据权利要求8所述的方法，其中该离子型表面活性剂是十二烷基硫酸钠（SDS）。

10.根据权利要求1到9中任一项所述的方法，进一步包括离心所述孵育溶液和分离所述微生物的步骤。

11.根据权利要求1到9中任一项所述的方法，进一步包括在过滤器上过滤所述孵育溶液的步骤，该过滤器具有将微生物保留在所述过滤器上的孔径。

12.根据权利要求1到11中任一项所述的方法，进一步包括裂解所述微生物的步骤。

13.根据权利要求1到12中任一项所述的方法，进一步包括基于核酸的分子检测。

14.一种包含用于选择性裂解在含有或疑似含有微生物的样品内的真核细胞并检测所述微生物的成套试剂盒，该成套试剂盒至少包含碱性缓冲剂和离子型表面活性剂。

15.一种用于检测在样品中的微生物的装置（1），包括：

-一个用于接受具有在1ml与20ml之间的体积的样品流体的裂解室（2），

-一个包含具有大约9.0或更高的pH的碱性缓冲剂并且包含离子型表面活性剂的贮器（3），或者一个包含具有大约9.0或更高的pH的碱性缓冲剂的贮器（31）和一个包含离子型表面活性剂的贮器（32），所述贮器连接到裂解室（2），

-一个连接到裂解室（2）以用于在裂解之后过滤该样品的过滤器（4），所述过滤器（4）具有将细菌保留在该过滤器上的孔径，以及

-一个用于分析DNA的存在的检测室（5）。

16.根据权利要求15所述的装置，其中该碱性缓冲剂具有高于9.0的pKa且/或该离子型表面活性剂是十二烷基硫酸钠。