[发明专利]使用凝胶渗透色谱法纯化病毒的方法

说明书

优先权申请的交叉引用

本申请要求2011年4月29日提交的美国临时申请第61/480,561号的优先权，该美国临时申请全文以引用的方式并入本文。

背景

病毒制造包括使用例如诸如凝胶渗透色谱法的色谱方法纯化病毒的步骤。虽然色谱方法是纯化病毒的有效方式，但是这些方法可能会导致病毒在色谱柱上遭到大量损失。因此，使用此类方法的病毒制造成本可能是相当高的。

概述

本文提供了用于使用凝胶渗透色谱法纯化病毒的洗脱缓冲液和方法。该方法可用于例如在病毒制造期间增大病毒从凝胶渗透色谱柱上的回收率。

本文所描述的纯化病毒的方法包括使凝胶渗透色谱柱与包含病毒和液体载体的病毒制品接触，其中病毒保留在凝胶渗透色谱柱上，以及用包含至少一种赋形剂、二价阳离子和磷酸盐缓冲盐水的洗脱缓冲液从凝胶渗透色谱柱上回收病毒。在这些方法中，所述至少一种赋形剂包含组氨酸或蔗糖。液体载体任选地为洗脱缓冲液。任选地，所述至少一种赋形剂包含甘露糖醇或山梨糖醇中的一者或多者。二价阳离子任选地为Mg²⁺。任选地，Mg²⁺以氯化镁形式存在。

磷酸盐缓冲盐水可包括一种或多种磷酸盐与一种或多种氯盐的组合。任选地，所述一种或多种磷酸盐包括磷酸二钠和/或磷酸二氢钾。任选地，所述一种或多种氯盐包括氯化钠和/或氯化钾。

洗脱缓冲液可进一步包括非离子型洗涤剂，例如，聚山梨酯80。任选地，洗脱缓冲液包括甘露糖醇、组氨酸、山梨糖醇、聚山梨酯80和MgCl₂，并且磷酸盐缓冲盐水包括磷酸二钠、磷酸二氢钾、氯化钠和氯化钾。任选地，洗脱缓冲液包括蔗糖、聚山梨酯80和MgCl₂，并且磷酸盐缓冲盐水任选地包括磷酸二钠、磷酸二氢钾、氯化钠和氯化钾。

包括在本文所描述的病毒制品中的病毒可以为，例如，溶瘤病毒和/或非包膜病毒。本文提供了病毒制品，其中病毒为呼肠孤病毒，例如哺乳动物呼肠孤病毒。哺乳动物呼肠孤病毒的实例为人呼肠孤病毒，例如血清3型病毒（例如，Dearing株呼肠孤病毒）。呼肠孤病毒任选地为重组的呼肠孤病毒、重排(reasserted)的呼肠孤病毒，或IDAC#190907-01。本文还描述了根据这些方法制备的纯化的病毒制剂。本文所描述的方法可进一步包括将病毒储存在洗脱缓冲液中。

本文还提供了包括凝胶渗透色谱柱和洗脱缓冲液的装置。洗脱缓冲液包括至少一种赋形剂、二价阳离子和磷酸盐缓冲盐水，并且所述至少一种赋形剂包括组氨酸或蔗糖。凝胶渗透色谱柱任选地用所述缓冲液平衡。任选地，所述装置进一步包括包含病毒和液体载体的病毒制品。

本文进一步提供了纯化的病毒制剂，其包括从凝胶渗透色谱柱上洗脱的病毒及与凝胶渗透色谱介质接触的洗脱缓冲液。在一些实例中，洗脱缓冲液包含至少一种赋形剂、二价阳离子和磷酸盐缓冲盐水，并且所述至少一种赋形剂包含组氨酸或蔗糖。

本文还提供了凝胶渗透色谱洗脱缓冲液。在一些实例中，洗脱缓冲液可包括至少一种赋形剂、二价阳离子、非离子型洗涤剂和磷酸盐缓冲盐水。在一些实例中，至少一种赋形剂包含组氨酸或蔗糖，并且洗脱缓冲液为凝胶渗透色谱洗脱缓冲液。任选地，洗脱缓冲液包括蔗糖、MgCl₂、聚山梨酯80和磷酸盐缓冲盐水。任选地，洗脱缓冲液包括甘露糖醇、组氨酸、山梨糖醇、MgCl₂、聚山梨酯80和磷酸盐缓冲盐水。

本文进一步提供了增大病毒从凝胶渗透色谱柱上的回收率的方法。所述方法包括使凝胶渗透色谱柱与包含病毒和液体载体的病毒制品接触，其中病毒保留在凝胶渗透色谱柱上，以及用包含至少一种赋形剂、二价阳离子和磷酸盐缓冲盐水的洗脱缓冲液从凝胶渗透色谱柱上回收病毒，其中所述至少一种赋形剂包含组氨酸或蔗糖。在这些方法中，病毒回收率比用磷酸盐缓冲盐水洗脱的病毒的回收率高至少约20%。任选地，病毒回收率比用磷酸盐缓冲盐水洗脱的病毒的回收率高至少约25%（例如，比用磷酸盐缓冲盐水洗脱的病毒的回收率高至少约30%或比用磷酸盐缓冲盐水洗脱的病毒的回收率高至少约35%）。

一个或多个方面的细节在下面的描述中示出。根据该描述和权利要求书，其他特征、目的和优点将是明显的。

详述