[发明专利]识别RIG-I通路调节因子的方法和细胞

说明书

技术领域

本文所公开的方法用于识别用于治疗脊椎动物中的病毒感染，包括RNA病毒感染的化合物。所识别的化合物调节RIG-I通路。

背景技术

总体来说，在美国和世界范围内RNA病毒表示巨大的公共健康问题。熟知的RNA病毒包括流感病毒(包括禽和猪分离物)、丙型肝炎病毒(HCV)、西尼罗病毒、SARS-冠状病毒、呼吸道合胞病毒(RSV)和人类免疫缺陷病毒(HIV)。

世界上超过1.7亿人被HCV感染，他们中的1.3亿是慢性携带者，具有发展为慢性肝病(肝硬化、肝癌和肝功能衰竭)的风险。同样地，在发达国家HCV占所有肝移植的三分之二。最近研究显示，由于慢性感染患者年龄的增长，HCV感染的死亡率正在上升。同样，季节性流感感染5-20％的人群，每年导致200,000人住院治疗和36,000人死亡。

与流行性感冒和HCV相比，西尼罗病毒导致的感染人数最少，2009年美国为663人。百分之二十的感染患者发展为严重型疾病，导致4.5％的死亡率。与流行性感冒和HCV不同的是，西尼罗病毒感染的治疗无核准疗法，由于其可能作为生物恐怖剂，因此是药物开发的高优先级病原体。

在所列出的RNA病毒中，仅存在流感病毒的疫苗。因此，药物治疗对于显著降低这些病毒相关的发病率和死亡率是重要的。遗憾的是，抗病毒药物的数量有限，多数效果不佳，并且几乎都受到病毒耐药性的快速进化和作用谱有限的困扰。此外，急性流行性感冒和HCV感染的治疗仅适度有效。HCV感染的护理标准、聚乙二醇干扰素和病毒唑仅对50％的患者有效，并且存在许多组合治疗相关的剂量限制性副作用。急性流行性感冒抗病毒药的种类，金刚烷和神经氨酸苷酶抑制剂二者仅在感染后48小时内有效，从而限制了治疗时机窗口。对金刚烷的高耐性已经限制了其用途，并且神经氨酸苷酶抑制剂的大量堆积最终会导致滥用和流行性感冒耐药株的出现。

大多数针对这些病毒靶向病毒蛋白的药物开发正努力进行。这是当前药物的作用谱窄，并且会出现病毒耐药性的大部分原因。大多数RNA病毒具有小基因组，并且多数编码小于十二个蛋白质。因此病毒靶标有限。基于前文所述，对病毒感染的有效治疗存在大量尚未满足的需求。

发明内容

本文所公开的方法包括如下事实：抗病毒物会导致病毒清除关键通路的下调。一个此类通路是RIG-I通路。本文所公开的方法提供了识别可在存在抗病毒物的情况下逆转或减少此类通路的下调的化合物，并且提供新型抗病毒药物开发的有效策略的方法。

作为非限制性例子，HCV病毒机制有助于抗病毒治疗剂和慢性宿主感染的耐性。HCV NS3／4A蛋白酶通过消除RIG-I受体依赖性信号通路来抑制先天免疫应答。因此，本文所公开的方法识别在下游作用或阻断NS3／4A干扰点的该通路调节剂。这些调节剂表示可有助于HCV感染的更有效治疗的可能治疗剂。因此，本文所公开的方法设计为识别在存在抗病毒干扰的情况下具有活性的调节剂。这些方法可应用于多个病毒系统。在一个实施方案中，调节剂是激动剂。

本发明有助于通过提供识别化合物的结构种类的方法来满足有效病毒治疗方法的需要，所述化合物在存在抗病毒物的情况下调节先天免疫信号转导。所识别的化合物结构种类使病毒药物开发的焦点从病毒蛋白的靶向转向靶向和调节宿主的先天抗病毒响应的药物的开发。此类化合物和方法可能更有效，对病毒耐药性出现的灵敏度更低，导致的副作用更少，并且对不同病毒的范围更有效(1)。在一个实施方案中，化合物刺激和／或增强先天免疫信号转导。

如前所述，RIG-I通路密切参与调节RNA病毒感染的先天免疫应答。预计RIG-I调节剂可用于多种病毒的治疗，包括(但不限于)：HCV、流行性感冒和西尼罗病毒。因此，本发明涉及识别治疗病毒感染，包括RNA病毒感染的化合物的方法，其中该化合物调节，并且在具体实施方案中刺激和／或增强RIG-I通路信号转导。

本发明提供识别调节RIG-I活性的化合物的方法，包括以下步骤：提供包含在启动子控制下的荧光素酶报告基因的细胞；使细胞与推测RIG-I调节化合物接触；测量荧光素酶活化；以及选择在存在一种或多种抗病毒物的情况下活化荧光素酶高于所选择的阈值的化合物。在一个实施方案中，所选择的阈值可以高于对照水平二、三、四或五个标准偏差。