[发明专利]用于裂解细胞的方法

权利要求书

1.用于裂解细胞的方法，通过下述

a）提供包含细胞的样品

b）向所述样品中加入至少包含与水不混溶的液体的裂解溶液

c）将步骤b）中获得的混合物加热至高于80℃的温度

d）在步骤c）中的温度高于100℃的情况下，将所述样品冷却至低于100℃的温度

e）将水或含水缓冲溶液加入所述混合物中，由此获得与水不混溶的液相和水相。

2.根据权利要求1的方法，其特征在于所述细胞是细菌细胞。

3.根据权利要求1或2的方法，其特征在于在步骤c）中，将所述混合物加热至100 – 150℃。

4.根据权利要求1 – 3中任一项的方法，其特征在于在步骤d）中，将所述样品冷却至20 – 40℃。

5.根据权利要求1 – 4中任一项的方法，其特征在于在步骤b）中加入的所述裂解溶液包含与水不混溶的离子液体。

6.根据权利要求5的方法，其特征在于所述离子液体的阴离子是双（三氟甲基磺酰基）酰亚胺[Ntf₂]。

7.根据权利要求1 – 5中任一项的方法，其特征在于在步骤b）中加入的所述裂解溶液包含三己基（十四烷基）鏻三（五氟乙基）三氟磷酸酯[Ttp][Fap]和/或1-丁基-1-甲基吡咯烷鎓盐双（三氟甲基磺酰基）酰亚胺[bmpyrr][Ntf₂]。

8.根据权利要求1 – 7中任一项的方法，其特征在于加入所述裂解溶液前，在步骤b1）中使所述样品与至少一种包含铵阳离子[NR₄]⁺的物质预温育

其中

在每种情况下，R彼此独立地指示

H，

具有1-20个C原子的直链或分支烷基，

具有2-20个C原子和一个或多个双键的直链或分支烯基，

具有2-20个C原子和一个或多个三键的直链或分支炔基，

具有3-7个C原子的饱和、部分或完全不饱和的环烷基，其可以通过具有1-6个C原子的烷基取代，其中一个或多个R可以部分或完全由卤素特别是-F和/或-Cl取代，或部分由-OH、-OR’、-CN、-C（O）OH、-C（O）NR’₂、-SO₂NR’₂、-C（O）X、-SO₂OH、-SO₂X、-NO₂取代，并且其中R中不处于α-位置中的一个或两个不邻近的碳原子可以替换为选自下述的原子和/或原子团：-O-、-S-、-S（O）-、-SO₂-、-SO₂O-、-C（O）-、-C（O）O-、-N⁺R’₂-、-P（O）R’O-、-C（O）NR’-、-SO₂NR’-、-OP（O）R’O-、-P（O）（NR’₂）NR’-、-PR’₂=N-或-P（O）R’-，其中R’ 可以是= H，非、部分或全氟化的C₁-至C₆-烷基，C₃-至C₇-环烷基，未取代或取代的苯基，并且X可以是 = 卤素。

9.根据权利要求1 – 8中任一项的方法，其特征在于加入所述裂解溶液前，在步骤b1）中使所述样品与至少一种基于N,N-二甲基-2-羟乙基铵[DMAE]的离子液体预温育。

10.根据权利要求1 – 9中任一项的方法，其特征在于在步骤e）后，使所述所得到的混合物与蛋白酶温育。

11.根据权利要求1 – 10中任一项的方法，其特征在于在步骤e）和与蛋白酶的任选温育后，通过实时PCR直接分析所述水相。

12.试剂盒，其包含具有与水不混溶的离子液体或与水不混溶的油的一个容器和具有蛋白酶的一个容器。