[发明专利]药剂递送粒子及其制造方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种药剂递送粒子及其制造方法以及含有该药剂递送粒子作为有效成分的药物组合物。

背景技术

为了向细胞、组织或个体导入目标基因并使其表达，开发有各种基因导入技术。利用了病毒的感染能力及复制能力的病毒载体也是其中之一，已知有源自逆转录病毒、腺病毒、腺伴随病毒等的各种载体。其中，近年来，腺伴随病毒载体在基因治疗中作为有用的基因导入载体备受期待。

腺伴随病毒(AAV；Adeno-Associated Virus，以下，在本说明书中，用“AAV”表示。)为属于细小病毒的非病原性的病毒，由于缺失自复制能力，因此，无法自律性增殖，增殖需要需要腺病毒及疱疹病毒的共感染，因此，感染性低。另外，也具有在宿主中免疫原性低的性质。根据这样的特征，作为基因导入的载体，具有安全性高这样的优点。另外，也开发有一种由于宿主范围宽可感染各种细胞，并且源自1～9型的各血清型AAV的载体(非专利文献1)，因此，应用各自的血清型中的感染靶细胞的特异性，可以在神经细胞、肌肉细胞、肝细胞等特定的细胞、组织及器官中进行基因表达。

但是，以AAV为代表的现有的病毒载体相对于给药个体均存在如下各种问题：在体内的基因表达的短暂性、野生型病毒混入的可能性、基因表达和其作用的表达需要时间、无法植入较大的基因、出现副反应时需要控制表达的机制等等。

为了解决上述问题，Samulski等提倡使用AAV衣壳的表达质粒使衣壳表达并将其用作药剂的递送载体(非专利文献2)。在衣壳内部不含病毒基因组的空衣壳、即中空衣壳具有靶细胞的特异性识别、吸附、侵入、脱壳等病毒的初期感染活性，但完全不具有源自病毒的基因，因此，不具有病毒的增殖活性。因此，中空衣壳可成为兼备药剂的靶细胞特异递送性和相对于给药个体的安全性的理想的药剂递送系统(DDS；Drug Delivery System)的载体。因此，为了将中空衣壳用作DDS的载体，向衣壳内部导入目标药剂的技术非常重要。

Samulski等出示有一种将中空衣壳在尿素、热或pH的条件下暂时变性，将药剂植入内部后进行再构成的导入方法(非专利文献2)。但是，若使尿素等变性剂作用于衣壳，则存在如下问题：衣壳所具有的初期感染活性消失，无法作为递送载体发挥作用。结果是，在保持衣壳的初期感染活性的状态下将作为递送物质的药剂导入中空衣壳的技术从提倡开始经过7年以上的现在也仍然未被确立。例如，在专利文献1中提出AAV中空粒子作为递送载体的有用性，但关于将中空衣壳用作递送载体的具体的实例没有任何记载。因此，该领域从业人员等认为Samulski提倡的技术是不可能实现的技术。

现有技术文献

专利文献

专利文献1:日本特愿2005-314476

非专利文献

非专利文献1:Okada T.and Takeda S.,Gene therapy for Duchenne muscular dystrophy.in A Guide to Human Gene Therapy(ed.by Roland W.Herzog and Sergei Zolotukhin),World Scientific,NJ.2010,5(1),pp113-123.

非专利文献2:Samulski,et al.,1995,Appl.No.:08/472;594

发明内容

发明要解决的问题

为了解决上述问题，本发明的目的在于，开发并提供一种在保持病毒的初期感染活性的状态下向中空衣壳导入核酸、肽和/或低分子化合物的方法。

另外，本发明的目的在于，提供一种通过所述方法制造的可以向靶细胞内特异性地递送目标药剂的药剂递送粒子。

进而，本发明的目的在于，开发并提供一种提高用于所述方法的源自AAV的中空衣壳的宿主细胞内生产效率的方法及病毒中空粒子的精制方法。

用于解决问题的手段

本发明人反复进行了潜心研究，结果成功地通过简便且有效的方法在维持病毒的初期感染活性的状态下向中空衣壳内部导入任意的核酸、肽和/或低分子化合物。另外，通过混合包含该药剂的衣壳和宿主细胞，也确认到可以将衣壳中所内包的药剂有效地导入该细胞内。进而，开发了一种增加宿主细胞内的中空衣壳的生产量的方法及中空衣壳的精制方法。本发明是基于这些见解而完成的，提供以下内容。