[发明专利]用于激发T细胞的方法

权利要求书

1.一种体外用于激发适合施用于病毒感染患者的抗原特异性CD4+和/或CD8+T细胞的方法，所述方法包括共培养来自待治疗患者的靶T细胞、单核细胞来源的树突细胞、病毒材料或病毒相关蛋白质或肽、以及针对相对于淋巴细胞为同种异体的抗原呈递细胞（APC）上的MHC I类和/或MHC II类抗原致敏的淋巴细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述致敏由包括培养非增殖抗原呈递细胞与外周血单核细胞（PBMC）的混合白细胞反应诱导，其中，所述PBMC相对于非增殖抗原呈递细胞是同种异体的。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述抗原呈递细胞选自由PBMC和单核细胞来源的树突细胞组成的组。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述单核细胞来源的树突细胞来自患者或来自健康供体。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，通过首先在包含GM-CSF和IL-4的组合物中培养单核细胞约1-7天以获得未成熟树突细胞，以及随后加入能使未成熟树突细胞成为成熟树突细胞的第二组合物通过培养至少约12小时，获得单核细胞来源的树突细胞。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述第二组合物包含TNFα、IL-1β、干扰素γ、干扰素α或β和TLR3配体，如聚I:C和/或TLR4配体。

7.根据权利要求5所述的方法，其中，所述第二组合物包含TNFα、干扰素γ、TLR3配体和/或TLR4配体和TLR7和/或TLR8激动剂。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述TLR3配体是聚I:C，所述TLR8激动剂是R848。

9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述感染材料或感染相关蛋白质或肽选自由来自患者的灭活病毒颗粒、与患者的病毒相同类型的同种异体病毒颗粒、以及已知的分离的和纯化的病毒蛋白质或肽组成的组。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述病毒材料为通过用编码病毒蛋白质的mRNA转染而负载至成熟树突细胞中的病毒蛋白质。

11.根据上述权利要求任一项所述的方法，其中，所述细胞培养至少约20天，优选约6-20天，更优选约8-14天。

12.根据上述权利要求任一项所述的方法，其中，向细胞培养物中加入抗CD3抗体和/或外源性IL-2、IL-7、IL-15、抗IL-4和/或IL-21。

13.根据上述权利要求任一项所述的方法，其中，通过将激发的抗原特异性CD4+和/或CD8+T细胞与新树突细胞、新致敏的淋巴细胞一起培养和任选地向细胞培养物中加入抗CD3抗体和/或外源性IL-2、IL-7、IL-15、抗IL-4和/或IL-21再刺激激发的抗原特异性CD4+和/或CD8+T细胞。

14.根据上述权利要求任一项所述的方法，其中，所述病毒感染为慢性病毒感染。

15.根据权利要求14所述的方法，其中，所述慢性病毒感染选自由HIV、HBV、HCV、CMV和EBV组成的组。

16.根据权利要求1-15中任一项所述的方法获得的抗原特异性CD4+和/或CD8+T细胞。

17.适合施用于患者的抗原特异性CD4+和/或CD8+T细胞，其中所述CD4+和/或CD8+T细胞：

－具有增殖能力但不会快速达到细胞凋亡

－表达低水平的膜联蛋白V，和/或

－在其细胞表面表达CD27和/或CD28。

18.根据权利要求16或17所述的抗原特异性CD4+和/或CD8+T细胞作为药物。

19.根据权利要求16或17所述的抗原特异性CD4+和/或CD8+T细胞用于治疗病毒感染或用于在人中引发抗病毒免疫学反应。

20.根据权利要求19所述的抗原特异性CD4+和/或CD8+T细胞，其中，所述CD4+和/或CD8+T细胞与治疗性病毒疫苗组合施用。

21.根据权利要求18-20中任一项所述的抗原特异性CD4+和/或CD8+T细胞，其中，在第一次刺激后施用所述CD4+和/或CD8+T细胞。