[发明专利]用于抗原特异性T细胞增殖的方法

权利要求书

1.一种体外用于激发适合施用于肿瘤患者的遗传修饰的抗原特异性CD4+和/或CD8+T细胞的方法，所述方法包括共培养来自待治疗患者的表达肿瘤抗原受体的靶T细胞、树突细胞、抗CD3抗体和针对抗原呈递细胞（APC）上的MHC I类和/或MHC II类抗原已经致敏的淋巴细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述肿瘤抗原受体选自T细胞受体（TCR）和嵌合抗原受体（CAR）。

3.根据权利要求1和2中任一项所述的方法，其中，所述致敏由包括培养非增殖抗原呈递细胞与外周血单核细胞（PBMC）的混合白细胞反应诱导，其中，所述PBMC相对于非增殖抗原呈递细胞是同种异体的。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述抗原呈递细胞选自由PBMC和单核细胞来源的树突细胞组成的组。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，通过首先在包含GM-CSF和IL-4的组合物中培养单核细胞约1-7天以获得未成熟树突细胞，以及随后加入能使未成熟树突细胞成为成熟树突细胞的第二组合物通过培养至少约12小时，获得树突细胞。

6.根据权利要求1或5所述的方法，其中，所述APC相对于所述淋巴细胞是同种异体的。

7.根据权利要求5所述的方法，其中，所述第二组合物包含TNFα、IL-1β、干扰素γ、干扰素α或β和TLR3配体，如聚I:C和/或TLR4配体。

8.根据权利要求5所述的方法，其中，所述第二组合物包含TNFα、干扰素γ、TLR3配体和/或TLR4配体，和TLR7和/或TLR8激动剂。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述TLR3配体是聚I:C，以及TLR8激动剂是R848。

10.根据上述权利要求任一项所述的方法，其中，所述细胞培养约4-20天。

11.根据上述权利要求任一项所述的方法，其中，向细胞培养物中加入外源性IL-2、IL-7、IL-15、抗IL-4和/或IL-21。

12.根据上述权利要求任一项所述的方法，其中，所述激发的抗原特异性CD4+和/或CD8+T细胞通过与新树突细胞、抗CD3抗体、新致敏的同种异体淋巴细胞一起培养，以及任选地向细胞培养物中加入外源性IL-2、IL-7、IL-15、抗IL-4和/或IL-21被再刺激。

13.根据权利要求1-12任一项所述的方法获得的抗原特异性CD4+和/或CD8+T细胞。

14.适合施用于患者的抗原特异性CD4+和/或CD8+T细胞，其中所述CD4+和/或CD8+T细胞：

－具有增殖能力

－至多40%的细胞应该表现膜联蛋白V阳性染色，和/或

－在其细胞表面表达CD27和/或CD28。

15.根据权利要求13或14所述的抗原特异性CD4+和/或CD8+T细胞用作为药物。

16.根据权利要求13或14所述的抗原特异性CD4+和/或CD8+T细胞，用作为治疗肿瘤或在人中引发抗肿瘤免疫学反应的药物。

17.根据权利要求16所述的抗原特异性CD4+和/或CD8+T细胞，其中，所述CD4+和/或CD8+T细胞与治疗性癌症疫苗组合施用。

18.根据权利要求16-17中任一项所述的抗原特异性CD4+和/或CD8+T细胞，其中，在第一次刺激后施用所述CD4+和/或CD8+T细胞。

19.根据权利要求16-17中任一项所述的抗原特异性CD4+和/或CD8+T细胞，其中，在再刺激后施用所述CD4+和/或CD8+T细胞。

20.根据权利要求13或14所述的抗原特异性CD4+和/或CD8+T细胞的用途，用于制备治疗肿瘤或在人中引发抗肿瘤免疫学反应的药物。

21.根据权利要求20的用途，其中，所述CD4+和/或CD8+T细胞与治疗性癌症疫苗组合施用。

22.根据权利要求20-21中任一项的用途，其中，在第一次刺激后施用所述CD4+和/或CD8+T细胞。

23.根据权利要求20-21中任一项的用途，其中，在再刺激后施用所述CD4+和/或CD8+T细胞。