[发明专利]鉴别含有核酸的对象物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及鉴别含有核酸的对象物（object）的方法，更确切地说，涉及使用荧光来容易地鉴别含有核酸的对象物的方法，所述核酸具有被核糖核酸酶（RNase）识别的核苷酸序列。

背景技术

即使在样品中所含的浓度极低，通过PCR（聚合酶链式反应）也能够大规模扩增核酸（例如寡核苷酸）。并且，此类以非常少的量被包含的核酸可以通过分析核苷酸序列进行鉴别。因此，通过向目标对象物或产品（包括油制品如油或涂料、火药和有价值的艺术作品等）中添加最低量的核酸，可以精确跟踪对象物或产品的来源和运输路径，还可以对真品（genuine product）进行精确鉴定。已有的报道过使用此类寡核苷酸来研究产品的运输路径的文章如下：

美国专利号5,665,538描述了用于在水溶液中对石油类移动进行监测的方法。在该说明书中清楚地阐述了如下过程：将DNA作为微示踪添加剂（microtrace additive）添加入石油类，然后在石油类移动后对含有DNA微示踪添加剂的石油类进行采样，随后用PCR对DNA微示踪添加剂进行检测。美国专利号5,451,505描述了用于对暴露于自然UV中的对象物进行监测的方法。确切地说，为了确认目标对象物，收集核酸，随后用PCR对该核酸进行扩增。同时，EP1171633描述了用于对核酸进行定量检测的方法，所述方法使用引物和荧光标记的探针作为核酸标签通过实时PCR进行。然而，这些传统方法的缺点在于，例如，它们不便于对浓度非常低的样品进行定量分析；很难对样品进行差异化的标记；存在被操作人员污染或操纵（例如，消除）等的风险；以及因为对这样的核酸进行检测用时很长，因而很难商业化。

为了克服现有技术的局限，开发出了在亲脂性溶剂中具有改善的溶解度的寡核苷酸和使用该寡核苷酸对目标对象物进行检测的方法（韩国专利号0851764）；还开发出了寡核苷酸标记物和使用该寡核苷酸标记物对交通工具进行检测的方法（韩国专利号0851765），所述寡核苷酸标记物在加入机动车的涂料膜（paint film）时，适于用作交通工具的识别标签或标记物。根据该方法，对以低浓度溶解于涂料中的寡核苷酸进行提取和回收，然后用PCR对核苷酸序列进行扩增。通过对该核苷酸序列进行测序，可以对目标对象进行跟踪和确认。然而，在这种方法中，序列信息是编码的，因此需要对编码序列进行解码这一过程。此外，就测序而言，这一过程的成本、精确度、处理时间以及复杂性这些问题也都是使得商业化难以进行的问题。也就是说，该方法在快速简单地判别真品方面以及确认编码信息（批号、制造商的独特识别号等）方面存在问题。根据近来油制品供应多样化的趋势，篡改油等级及经销非法汽油已经成为社会问题。因此，为了制造商品牌形象的管理和经销秩序的建立，需要开发出更加快速且更加简单有效的方法来对市场上油制品的种类和质量进行鉴别和识别。

发明内容

技术问题

本发明被设计为用以改善使用核酸识别对象物的传统方法的问题。因此，本发明的目的是提供一种通过使用从核酸标记的对象物中回收的核酸而快速地鉴别所标记的核酸标记物的方法。

技术方案

所述鉴别含有核酸的对象物的方法包括下列步骤：

（1）制备含有核酸的对象物，所述核酸具有与RNA-双探针（RNA-dual probe）的核苷酸序列互补的核苷酸序列；

（2）使所述对象物中含有的核酸与含有所述RNA-双探针和RNase的缓冲液进行反应，所述RNA-双探针分别缀合有报告子和淬灭子；以及

（3）对由所述报告子产生的荧光进行检测。

在本说明书中，术语“RNA-双探针”是指双标记的RNA探针，在所述RNA探针的结构中，报告子和淬灭子分别与RNA探针结合。报告子和淬灭子可缀合于所述RNA探针的任意位点，但更优选可缀合于所述RNA的两端。