[发明专利]用于从水性培养基中更好分离出疏水性有机溶液的方法有效
申请号: | 201210599411.8 | 申请日: | 2012-12-21 |
公开(公告)号: | CN103254089A | 公开(公告)日: | 2013-08-21 |
发明(设计)人: | H-G·亨内曼;S·沙费尔;M·韦泽尔;T·哈斯;J·吉伦;K·贝泽;S·哈夫凯姆艾尔;M·波埃特厄尔;F·厄尔哈特;M·席贝尔胡特 | 申请(专利权)人: | 赢创工业集团股份有限公司 |
主分类号: | C07C227/40 | 分类号: | C07C227/40;C07C229/08 |
代理公司: | 中国专利代理(香港)有限公司 72001 | 代理人: | 石克虎;林森 |
地址: | 德国*** | 国省代码: | 德国;DE |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 水性 培养基 更好 分离 疏水 有机 溶液 方法 | ||
1.方法,其包括以下步骤:
a)提供含代谢活性细胞的水性培养基,
b)使水性培养基与疏水性有机溶液接触,
c)从水性培养基中分离出疏水性有机溶液,
其中,与其野生型相比,所述细胞具有至少一种降低了活性的催化脂肪酸的β-氧化反应的酶。
2.根据权利要求1所述的方法,其中所述催化脂肪酸的β-氧化反应的酶是选自FadA、FadB、FadD、FadE和FadL或其变体的酶,优选FadE或其变体。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其中所述有机溶液包含至少一种选自下列的溶剂:在室温下为液态的取代和未取代的链烷烃、环烷烃、环烯烃、芳基化合物、脂肪酸、脂肪酸酯、醇、杂环烷烃、杂环烯烃和杂芳基化合物。
4.根据权利要求3所述的方法,其中所述有机溶液包含具有多于12个碳原子的脂肪酸或其酯,优选油酸、芥酸或者月桂酸甲酯。
5.根据权利要求1~4中任一项所述的方法,其中所述细胞具有重组的烷烃羟化酶。
6.代谢活性细胞的用途,所述细胞用于从含所述代谢活性细胞的水性培养基中更好分离出疏水性有机溶液,与其野生型相比,该细胞具有降低了活性的催化脂肪酸的β-氧化反应的酶,所述酶优选选自FadA、FadB、FadD、FadE和FadL及其变体,更优选FadE。
7.敲除催化脂肪酸的β-氧化反应的酶的用途,所述酶优选选自FadA、FadB、FadD、FadE和FadL或其变体,更优选FadE变体,其作为用于从含所述代谢活性细胞的水性培养基中更好分离出疏水性有机溶液的代谢活性细胞的基因组成的部分。
8.细胞,与其野生型相比,该细胞具有降低了活性的催化脂肪酸的β-氧化反应的酶,还包含重组的单加氧酶,更优选包含烷烃羟化酶。
9.根据权利要求8所述的细胞,其中所述催化脂肪酸的β-氧化反应的酶是选自FadA、FadB、FadD、FadE和FadL变体或其变体的酶,更优选是FadE或其变体。
10.反应混合物,其包含具有代谢活性细胞的水溶液和疏水性有机溶液,其中与其野生型相比,所述细胞具有降低了活性的催化脂肪酸的β-氧化反应的酶。
11.根据权利要求10所述的反应混合物,其中所述催化脂肪酸的β-氧化反应的酶是选自FadA、FadB、FadD、FadE和FadL或其变体的酶,更优选是FadE或其变体。
12.根据权利要求10~11中任一项所述的反应混合物,其中所述疏水性有机溶液包含选自下列的至少一种溶剂:在室温下为液态的取代和未取代的链烷烃、环烷烃、环烯烃、芳基化合物、脂肪酸、脂肪酸酯、醇、杂环烷烃、杂环烯烃和杂芳基化合物。
13.根据权利要求10~12中任一项所述的反应混合物,其中所述疏水性有机溶液包含具有多于12个碳原子的脂肪酸或其酯,优选油酸、芥酸或者月桂酸甲酯。
14.根据权利要求1~5中任一项所述的方法,根据权利要求6~7中任一项所述的用途,或者根据权利要求10~13中任一项所述的反应混合物,其中所述代谢活性细胞是具有重组的烷烃羟化酶和转氨酶的细胞,此外优选包含选自醇脱氢酶、丙氨酸脱氢酶和内酰胺水解酶的至少一种酶。
15.根据权利要求1~5和14中任一项所述的方法,根据权利要求6~7和14中任一项所述的用途或者根据权利要求10~14中任一项所述的反应混合物,其中所述细胞是低级真核细胞或者原核细胞,优选是大肠杆菌。
16.根据权利要求1~5和14~15中任一项所述的方法,根据权利要求6~7和14~15中任一项所述的用途或者根据权利要求10~15中任一项所述的反应混合物,其中所述细胞是重组细胞。
17.根据权利要求1~5和14~16中任一项所述的方法,根据权利要求6~7和14~16中任一项所述的用途或者根据权利要求10~16中任一项所述的反应混合物,其中所述疏水性有机溶液构成疏水性有机溶液和水性培养基的总体积的至少5%,优选至少20%。
18.根据权利要求1~5和14~17中任一项所述的方法,根据权利要求6~7和14~17中任一项所述的用途或者根据权利要求10~17中任一项所述的反应混合物,其中,在接触时,所述水性培养基的pH值在5~9,更优选在6~8之间。
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