[发明专利]鉴定和表征来自生产多杀菌素的刺糖多孢菌的SIPONACTIN生物合成基因簇有效

专利信息
申请号: 201210599350.5 申请日: 2012-12-28
公开(公告)号: CN103224905B 公开(公告)日: 2018-06-12
发明(设计)人: N·帕拉尼亚潘;P·莱沃尔;P·R·格劳普纳 申请(专利权)人: 陶氏益农公司
主分类号: C12N1/21 分类号: C12N1/21;C12N15/31;C12P19/62;C12P17/18;C07D513/08;C12R1/645
代理公司: 北京坤瑞律师事务所 11494 代理人: 吴培善
地址: 美国印*** 国省代码: 美国;US
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摘要:
搜索关键词: 多杀菌素 孢菌 修饰 生物合成基因簇 核酸分子编码 核酸序列编码 生物体 核酸分子 核酸序列 生产菌株 失活 突变 替代 生产
【说明书】:

本公开内容涉及产生多杀菌素生产菌株的方法,包括通过导入、突变、缺失、替代或失活下述核酸序列来修饰编码SIPNACTIN的核酸分子,所述核酸序列编码一种或多种由所述核酸分子编码的活性。还公开了用于产生修饰的刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)生物体的方法。

优先权要求

本申请要求2011年12月28日提交的、名为“鉴定和表征来自生产多杀菌素的刺糖多孢菌的SIPONACTIN生物合成基因簇(IDENTIFICATION AND CHARACTERIZATION OF THESPINACTIN BIOSYSNTHESIS GENE CLUSTER FROM SPINOSYN-PRODUCINGSACCHAROPOLYSPORA SPINOSA)”的美国临时专利申请系列号61/580,947的优先权。

技术领域

本公开内容一般涉及生产具有减少的杂质的多杀菌素(spinosyn)的方法,并涉及Spinactin及其生物合成。

背景

根据美国专利号5,362,634中公开的内容,发酵产物A83543是由刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)产生的相关化合物家族。该家族的已知成员被称为因子或组分,每种都已被赋予了识别性字母命名。这些化合物在后文中被称为多杀菌素A、B等。多杀菌素化合物可用于控制蛛形纲动物(arachnid)、线虫和昆虫,特别是鳞翅目和双翅目的物种,并且它们是相当环境友好的,具有吸引人的毒理学特性(toxicological profile)。

天然产生的多杀菌素化合物由5,6,5-三环系统组成,与12元大环内酯、中性糖(鼠李糖)和氨基糖(福乐糖胺)融合(参见Kirst等人(1991))。如果不存在氨基糖,则该化合物被称为A、D等的拟糖苷配基(pseudoaglycone);而如果不存在中性糖,则化合物被称为A、D等的逆拟糖苷配基(reverse pseudoaglycone)。更优选的命名法是称拟糖苷配基为多杀菌素A17-Psa、多杀菌素D17-Psa等,并且称逆拟糖苷配基为多杀菌素A9-Psa、多杀菌素D9-Psa等。

可以通过发酵从培养物NRRL18395、18537、18538、18539、18719、18720、18743和18823生产天然产生的多杀菌素化合物。这些培养物已经保藏,并且构成农业研究机构中西部地区北部区研究中心(Midwest Area Northern Regional Research Center,Agricultural Research Service,United States Department of Agriculture,1815North University Street,Peoria,Ill.,61604)的原种培养物保藏物的一部分。

美国专利号5,362,634和相应的欧洲专利申请号375316A1涉及多杀菌素A、B、C、D、E、F、G、H和J。这些化合物据称是通过培养选自以下的新型微生物刺糖多孢菌的菌株生产的:NRRL18395、NRRL18537、NRRL18538和NRRL18539。

WO93/09126涉及多杀菌素L、M、N、Q、R、S和T。其中还讨论了2种多杀菌素J生产菌株:NRRL18719和NRRL18720,和产生多杀菌素Q、R、S和T的菌株:NRRL18823。

WO94/20518和美国专利号5,670,486涉及多杀菌素K、O、P、U、V、W和Y,及其衍生物。还讨论了多杀菌素K生产菌株NRRL18743。

生产多杀菌素化合物中的难点来自于这样的事实,即需要非常大的发酵体积来生产非常少量的多杀菌素。非常希望增加多杀菌素的生产效率,并由此增加多杀菌素的可利用度,同时降低其成本。

另一个难点是通过这样的方法生产多杀菌素化合物,所述方法减少或去除杂质,同时对多杀菌素生产水平没有有害影响。

公开内容

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