[发明专利]鉴定和表征来自生产多杀菌素的刺糖多孢菌的SIPONACTIN生物合成基因簇

权利要求书

1.产生修饰的刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)生物体的方法，所述方法包括：

通过将attB序列克隆到安普霉素抗性基因盒中构建具有attB连接位点的安普霉素抗性基因盒(安普霉素-attB盒)；

用所述安普霉素-attB盒靶向刺糖多孢菌的spinactin生物合成基因簇中的噻唑啉酰亚胺还原酶基因，从而产生该spinactin基因簇的7.6Kb缺失，以提供修饰的核苷酸序列；和

将该修饰的核苷酸序列导入宿主刺糖多孢菌生物体中，使得所述修饰的核苷酸序列稳定整合入所述宿主刺糖多孢菌生物体的基因组DNA中，由此产生修饰的刺糖多孢菌生物体。

2.根据权利要求1的方法，该方法进一步包括：

鉴定刺糖多孢菌生物体中的spinactin生物合成基因簇，其中该spinactin生物基因簇包含噻唑啉酰亚胺还原酶基因。

3.根据权利要求1的方法，其中所述修饰的刺糖多孢菌生物体产生多杀菌素A和D。

4.包含编码修饰的多杀菌素的核酸分子的宿主细胞，其中所述分子是通过权利要求1的方法获得的。

5.根据权利要求1的方法，其中缺失了spinactin生物合成基因簇的7.6kb的连接的核苷酸序列如SEQ ID NO:12的核苷酸序列所示。

6.根据权利要求1的方法，其中所述修饰的刺糖多孢菌生物体产生比导入所述修饰的核苷酸序列前的所述宿主刺糖多孢菌生物体中所产生的更少的spinactin。

7.根据权利要求6的方法，其中所述修饰的刺糖多孢菌生物体不产生spinactin。

8.根据权利要求1的方法，其中所述修饰的刺糖多孢菌生物体产生：

与导入所述修饰的核苷酸序列前的宿主刺糖多孢菌生物体中产生的多杀菌素A的量基本上相同的量的多杀菌素A；

与导入所述修饰的核苷酸序列前的宿主刺糖多孢菌生物体中产生的多杀菌素D的量基本上相同的量的多杀菌素D；和

与导入所述修饰的核苷酸序列前的宿主刺糖多孢菌生物体中产生的spinactin的量相比更少量的spinactin。

9.产生多杀菌素的混合物的方法，所述方法包括：

提供至少一种通过权利要求1的方法获得的修饰的刺糖多孢菌生物体的培养物；

在发酵条件下培养所述至少一种修饰的刺糖多孢菌生物体；和

从该修饰的刺糖多孢菌发酵培养物获得多杀菌素的混合物。

10.根据权利要求9的方法，其中从所述修饰的刺糖多孢菌发酵培养物获得的多杀菌素的混合物包含多杀菌素A和多杀菌素D中的至少一种。

11.根据权利要求9的方法，其中从所述修饰的刺糖多孢菌发酵培养物获得的多杀菌素的混合物不包含spinactin。

12.通过根据权利要求1的方法产生的修饰的刺糖多孢菌生物体。

13.根据权利要求12的修饰的刺糖多孢菌生物体，其中所述生物体包含参与多杀菌素生物合成的转基因。

14.根据权利要求13的修饰的刺糖多孢菌生物体，其中所述参与多杀菌素生物合成的转基因稳定整合入生物体的基因组DNA中稳定整合所述核酸的位点上。

15.产生多杀菌素的方法，所述方法包括：

提供权利要求12的修饰的刺糖多孢菌生物体；和

在发酵条件下培养所述生物体，

由此产生至少一种多杀菌素。