[发明专利]一种具有降血糖活性竹叶黄酮提取物的制备方法

说明书

（一）技术领域

本发明涉及一种具有降血糖活性竹叶黄酮提取物的制备方法。 

（二）背景技术

竹子的医疗作用早已为我国人们所认识，据《本草纲目》记，苦竹、甘竹、淡竹及竹沥、竹笋等均有不同的药用价值。竹子中的药用成分主要是黄酮类成分，竹叶黄酮具有明显的抗脂质过氧化、清除羟自由基和调节血脂功能及抗过敏、抗炎、抗菌、抗突变、抗肿瘤、抗溃疡、抗病毒、保护心血管疾病及保肝等生理活性，是一种十分理想的天然生物黄酮新资源。 

（三）发明内容

本发明目的旨在充分利用我国竹叶资源，提供一种具有降血糖活性的高黄酮含量的竹叶提取物制备方法，并应用于食品与保健品中，克服现有技术的不足，具有工艺简单、操作方便、产品竹叶黄酮含量高、设备投资少、无环境污染的优点。 

本发明采用的技术方案是： 

一种具有降血糖活性高含量竹叶黄酮提取物的制备方法，所述方法按如下步骤进行： 

（1）将新鲜竹叶清洗、烘干后粉碎并过20目筛，获得竹叶粉末，将竹叶粉末与水以质量比1:7~10混合后，在室温下搅拌浸泡1~3h，然后升温至80~100℃下加热回流浸提0.5~3h，冷却至30~50℃后过滤，获得滤液，即竹叶水提物； 

（2）在步骤（1）获得的竹叶水提物中搅拌加入絮凝剂，在室温下静 置2~ 6h，然后离心（优选在每分钟10000转的条件下，于20℃离心10分钟），弃去沉淀，获得上清液a；所述絮凝剂为海藻酸钠、壳聚糖或羧甲基纤维素； 

（3）将步骤（2）获得的上清液a减压浓缩后加入乙醇水溶液使乙醇体积终浓度为70~90%，静置4~12小时后，离心，获得上清液b，将上清液b减压浓缩至浓缩物无乙醇味，获得浸膏；通常工艺上常选用95%的乙醇在醇沉，浓缩物中无乙醇味通常指乙醇体积浓度低于5%。 

（4）将步骤（3）获得的浸膏加水配成混合液，再将混合液用萃取剂在50~80℃条件下搅拌30~ 90分钟进行萃取，萃取完全后冷却至30~40℃，静置分层，获得上层萃取液和下层萃余液，将上层萃取液减压浓缩（优选于旋转蒸发仪中，在真空度为0.09Mpa，50~60℃条件下减压浓缩），除去溶剂和水，即得竹叶黄酮粗提液；所述萃取剂由有机溶剂A和有机溶剂B以体积比为1000:1~5混合组成，有机溶剂A为乙酸乙酯或乙酸乙酯与异丙醇以体积比5~9:1的混合溶液；有机溶剂B为乙酸； 

（5）将步骤（4）获得竹叶黄酮粗提液进行柱层析，以聚乙烯聚吡咯烷酮（PVPP）为吸附剂，以体积浓度70%~80%的乙醇水溶液为洗脱剂，收集含目标组分的洗脱液，将洗脱液减压浓缩除去水（优选在真空度为0.09Mpa，50~60℃条件下减压浓缩），获得竹叶黄酮提取物，再以2BV体积浓度 95%的乙醇水溶液洗脱层析柱来再生聚乙烯聚吡咯烷酮（PVPP）。 

进一步，步骤（2）所述絮凝剂以质量浓度0.1~5%絮凝剂水溶液的形式加入。 

进一步，步骤（2）所述絮凝剂水溶液与竹叶水提物体积比为1~5:1000。 

进一步，步骤（2）所述絮凝剂以质量浓度1%絮凝剂水溶液的形式加入，絮凝剂水溶液与竹叶水提物体积比为2:1000。 

进一步，将步骤（2）获得的上清液a体积减压浓缩至步骤（1）获得的竹叶水提物体积的1/20~1/30倍，加入体积浓度95%乙醇水溶液使乙醇体积终浓度为70~90%（优选80%）。 

进一步，所述混合溶液是将步骤（3）获得的浸膏加水配成步骤（1）获得的竹叶水提物体积的1/10~1/8倍。 

进一步，步骤（4）中所述萃取剂由有机溶剂A和有机溶剂B以体积比为1000:2混合组成，有机溶剂A为乙酸乙酯或乙酸乙酯与异丙醇以体积比8:1的混合液；有机溶剂B为乙酸。 

进一步，步骤（4）中所述萃取剂的体积用量与混合液的体积比为2~5:1。 

进一步，步骤（5）中所述柱层析按如下步骤进行：将步骤（4）获得竹叶黄酮粗提液以0.01~ 0.05BV/min（优选0.02BV/min）速度加入装有聚乙烯聚吡咯烷酮的层析柱，先用2~5BV的蒸馏水洗脱至流出液无色，再以3~5 BV 体积浓度70%~80%（优选75%）的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，将洗脱液减压浓缩除去水，获得竹叶黄酮提取物。 

进一步，所述步骤（5）中聚乙烯聚吡咯烷酮用量为竹叶粉末质量的1/2。