[发明专利]一种能同时测定替米考星与磺胺含量的HPLC方法

说明书

技术领域

本发明属于制剂分析方法，具体是发明了一种能同时测定替米考星与磺胺含量的HPLC方法，该测定方法稳定、准确度高，能很好的指导兽药临床对药物有效成分含量的检测，能大幅度提高监测效率。

背景技术

随着各种抗生素药物的使用，畜禽面临着耐药性更强的细菌和病毒的威胁，在临床上复方制剂的开发、使用是解决细菌耐药性的一个重要方向。大环内酯类和磺胺类药物因有明显的增效作用，因此在临床上经常进行联合使用。

作为大环内酯类新型兽用药品，替米考星（tilmicosin）原料药于2005 年初，由农业部批准山东济兴医化有限公司济宁兽药厂生产；磺胺类药物是近十几年来广泛使用、高效的抑菌药，它通过干扰细菌叶酸代谢而抑制细菌的生长繁殖。

磺胺类药物与大环内酯类药物的联用虽然已经非常普遍，在进口兽药审批中，农业部1993年批准美国礼来公司的磷酸泰乐菌素－磺胺二甲嘧啶预混剂产品在中国销售，该产品在中国实现了连续3次、每次5年期的再注册；我国从2005年开始批准四川巴尔动物药业有限公司的磷酸泰乐菌素、磺胺二甲嘧啶预混剂，2008年公开的发明专利“畜禽饲料的抗菌促生长预混剂及其制备方法”（公开号CN101238857A，公开日2008年8月13日），公开了磷酸替米考星和磺胺二甲嘧啶的预混剂组方。但这些复方制剂中，磺胺二甲嘧啶钠含量的测定都使用了滴定法。滴定法测定含量时存在误差大、测定不准确等严重不足。并且上述两种成分的制剂在进行含量测定时，大环内酯类采用的是液相法，磺胺二甲嘧啶采用的是滴定法，这也制约工作效率、耗费人力、物力。因此本发明主要发明了一种同时测定含替米考星与磺胺二甲嘧啶钠含量的HPLC方法。对此方法我们进行了方法专属性、线性关系实验、精密度实验、重现性实验、耐用性以及加样回收测定实验，结果证明该方法能有效的对复方制剂中的替米考星、磺胺二甲嘧啶钠的含量进行测定，具有较强的实用性。该方法在临床使用中将发挥更大作用。

发明内容

本发明解决了替米考星和磺胺二甲嘧啶钠同时、准确测定的问题。

本发明的特色在于

一种能同时测定替米考星与磺胺含量的HPLC方法，是通过改变梯度洗脱的流动相比例和提取液的配比，达到将制剂中的主要成分逐一分离并进行外标法含量测定。

本发明涉及的梯度洗脱程序为：

本发明涉及的流动相为：乙腈为流动相A；水-磷酸二丁胺溶液〔取二丁胺16.8mL，加磷酸溶液（1→10）70mL，边加边搅拌，放冷后，加水至100mL〕（975：25）用磷酸调节pH值至2.5±0.1为流动相B； 10%甲醇溶液为流动相C。

本发明所使用的提取液的配制方法为：取乙腈400-600ml和pH5.0-8.0的磷酸盐缓冲液25 mL加入适量水中，用水稀释至1000 mL。

本发明其所述的磺胺主要为磺胺二甲嘧啶、磺胺二甲嘧啶钠、磺胺氯吡嗪钠、磺胺氯哒嗪钠中的一种或多种。

本发明是这样来实现的：

色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Diamonsil   C18，4.6mm×  250mm，5μm, 10 nm），柱温30±5℃；流速为1.1mL/min；检测波长为280nm；

取含替米考星、磺胺的组合物适量，精密称定，置棕色量瓶中，加提取液稀释至每1ml含替米考星0.5 mg，摇匀，滤过，作为供试品溶液；

替米考星对照品溶液的制备  精密称取替米考星对照品约25mg，置50mL棕色量瓶中，用提取液稀释至刻度，摇匀，得每1mL中含0.5mg的溶液，作为替米考星对照品溶液。

磺胺对照品溶液的制备  精密称取磺胺对照品约25mg，置50mL棕色量瓶中，用提取液稀释至刻度，摇匀，得每1mL中含0.5mg的溶液，作为磺胺对照品溶液。

精密量取对照品溶液和供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算替米考星（C₄₆H₈₀N₂O₁₃）（以顺式和反式异构体峰面积之和）和磺胺的含量。

本发明的有益效果是：

本发明为方法学发明，此方法基于HPLC法建立，本发明不仅很好的解决了替米考星和磺胺的同时测定问题，而且还可以有效检测此两主要成分带入的杂质成分。

本发明耐用性的考察