[发明专利]霉菌氧化物的生物发酵方法

说明书

技术领域

本发明属于一种甾体激素类药物霉菌发酵工艺，尤其是一种霉菌氧化物的生物发酵方法。

背景技术

甾体化合物类药物生产过程中，“霉菌氧化物”是制备激素类药物重要的中间体，通过生物发酵，使用“黑根霉（Rhizzopus nigricans）”将底物“沃氏氧化物”转化为“霉菌氧化物”，该过程受着诸多因素、条件的限制。虽多年来工艺不断改进，各项指标有所提高，但其转化率、收率、指标并无大的突破。近年来，随着激素类药物不断研制、开发，一些高效、低毒产品不断推向市场，“霉菌氧化物”这个重要的中间体，更加显现出它的重要地位。因此，在稳定产品质量前提下，改变突破现有工艺达到转化率、收率的高指标，产品的高产率尤显重要。

据检索，专利文献CN102174630公开了一种甾体激素类药物霉菌发酵工艺，尤其涉及到霉菌发酵生物合成制备霉菌氧化物新工艺，它是以碳源、氮源和消沫剂为主要原料，碳源：葡萄糖60～85kg；氮源：玉米浆60～85kg；蚕蛹粉10～20kg；硫酸铵5～10kg；消沫剂：聚醚1000～2000ml；搅拌反应，并在生物发酵过程中通入空气，在26±4℃搅拌反应，并在生物发酵过程中进行通气，经24-72h氧化反应，再经板框压滤脱水、吹干，将底物沃氏氧化物转化为含有霉菌氧化物的菌丝体，再经丙酮提取得到霉菌氧化物粗品，经甲苯、氯仿混合溶剂精制得到霉菌氧化物精品。

本发明在上述发明的基础上，经过进一步研发，将培养基的成分经过科学配比，获得更加优良的培养基配方，收率获得很大提高。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的步骤之处，提供一种霉菌氧化物的生物发酵方法，本发明重新对发酵培养基进行配伍，提出一种全新的培养基成分，大幅度提高产品转化率和收率。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种霉菌氧化物的生物发酵方法，所用培养基的成分及重量份数如下：葡萄糖80-90

玉米浆50-70

蚕蛹粉2-10

硫酸铵2-10

棉籽蛋白2-10。

而且，培养基还包括消泡剂。

而且，所述消泡剂为聚醚消泡剂。

而且，发酵的具体方法如下：

⑴将发酵培养基一次投入一级种子罐中，加水，搅拌均匀后，加入30%碱液，调整pH4.8-5.0，进行蒸汽灭菌，降温至27-28℃，接入“黑根霉”孢子悬浮液，通气搅拌下培养18-20h，镜检达标后形成一级种子液；

⑵二级发酵罐培养基同一级发酵罐配比，灭菌，降温，移入一级种子液后，通气、搅拌、培养18-20h，镜检达标，投入底物“沃氏氧化物”，进行生物氧化至24-50h，取样镜检，及色谱测试底物达标后，提高温度至50-60℃时，培养结束获得霉菌氧化物培养液及菌丝体，放料滤干再提纯精制霉菌氧化物。

本发明的优点和积极效果是：

本发明在氮源的组分中首次使用了棉籽蛋白最为新的氮源配方，弥补蛋白质含量偏低，氨基酸配方不够合理等缺陷，同时棉籽蛋白中含有微量元素铁，不会给微生物的生长产生不良影响，进而提高发酵效率，增加收率。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明进一步说明，下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。

本发明的化学反应式是：

沃氏氧化物          霉菌氧化物

实施例1

发酵培养基成分如下：

碳源：葡萄糖90kg

氮源：玉米浆70kg

蚕蛹粉10kg

硫酸铵10kg

棉籽蛋白10kg（北京中棉紫光生物科技有限公司生产的脱酚棉籽蛋白）

消泡剂：聚醚1000ml

一种霉菌氧化物的生物发酵方法，步骤如下：

1、一级发酵：将发酵培养基一次投入2.5吨一级种子罐中，加自来水至2吨。打开搅拌机搅均匀后，加入30%碱液，调整pH4.8-5.0，达到工艺要求后，进行蒸汽灭菌，降温至27-28℃，接入1200ml制备好的“黑根霉”孢子悬浮液通气搅拌下培养18-20h，镜检无其他杂菌，后形成一级种子液，移入二级发酵罐内。