[发明专利]山梨木糖假丝酵母及其在制备(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯中的应用

权利要求书

1.一种山梨木糖假丝酵母ZJB-12164（Candida sorboxylosa ZJB-12164），保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国，武汉，武汉大学，邮编430072，保藏编号CCTCC No：M 2012420，保藏日期2012年10月22日。

2.一种权利要求1所述山梨木糖假丝酵母ZJB-12164在生物催化制备(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯中的应用，其特征在于所述的应用为：以山梨木糖假丝酵母ZJB-12164发酵培养获得的含酶湿菌体为催化剂，以4-氯乙酰乙酸乙酯为底物，于pH4.0~9.0的水或缓冲液构成的转化体系a中，在20~ 45℃下进行转化反应，反应完全后，将转化液后处理，获得所述(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯。

3.如权利要求2所述山梨木糖假丝酵母ZJB-12164在生物催化制备(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯中的应用，其特征在于所述转化体系a中底物初始浓度为10~2000mmol/L。

4.如权利要求2所述山梨木糖假丝酵母ZJB-12164在生物催化制备(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯中的应用，其特征在于转化体系a中含酶湿菌体质量计为10~200g/L，所述含酶湿菌体含水质量为70~90%。

5.如权利要求2所述山梨木糖假丝酵母ZJB-12164在生物催化制备(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯中的应用，其特征在于所述转化体系a中还包括辅助底物，由辅助底物、底物、催化剂与pH4.0~9.0的水或缓冲液构成转化体系b，所述辅助底物为下列之一：甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖或甘油。

6.如权利要求5所述山梨木糖假丝酵母ZJB-12164在生物催化制备(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯中的应用，其特征在于所述应用为：以山梨木糖假丝酵母ZJB-12164发酵培养获得的含酶湿菌体为催化剂，以4-氯乙酰乙酸乙酯为底物，加入辅助底物，于pH4.0~9.0的水或缓冲液构成的转化体系b中，在20~ 45℃下进行转化反应，反应完全后，将转化液后处理，获得所述(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯；所述转化体系b中底物初始浓度为10~2000mmol/L，含酶湿菌体添加量以湿菌体质量计为10~200g/L，所述含酶湿菌体含水质量为70~90%，辅助底物初始浓度为10~2000mmol/L，所述辅助底物为下列之一：甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖或甘油。

7.如权利要求2或5所述山梨木糖假丝酵母ZJB-12164在生物催化制备(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯中的应用，其特征在于所述转化反应是在20~45℃下反应0.1~36h。

8.如权利要求2或5所述山梨木糖假丝酵母ZJB-12164在生物催化制备(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯中的应用，其特征在于所述转化液后处理的方法为：反应结束后，将转化液离心，去除菌体细胞，取上清液用等体积乙酸乙酯萃取，取有机层用无水Na₂SO₄脱水、过滤，滤液即为含(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的粗品，将粗品分离纯化，即得(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯。

9.如权利要求2或5所述山梨木糖假丝酵母ZJB-12164在生物催化制备(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯中的应用，其特征在于所述转化体系a或转化体系b均是由蒸馏水、自来水、磷酸盐缓冲液或柠檬酸盐缓冲液形成的pH4.0~9.0单相体系，或者水与有机介质形成的pH4.0~9.0双相体系；所述有机介质为正己烷、正辛烷、异辛烷、正庚烷、二甲苯、环己烷、乙酸乙酯或乙酸丁酯。

10.如权利要求2或5所述山梨木糖假丝酵母ZJB-12164在生物催化制备(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯中的应用，其特征在于所述含酶湿菌体按如下方法制备：

(1) 斜面培养：将山梨木糖假丝酵母ZJB-12164菌株接种于斜面培养基，于20~37℃下培养12~48小时，获得斜面活化菌种；所述斜面培养基为豆芽汁琼脂培养基，配置方法为：50~200g新鲜黄豆芽放入烧杯中，加入水，煮沸半个小时，纱布过滤得上清，再加入10~50g葡萄糖，15~20g琼脂，补加水至1L；

(2) 种子培养：将斜面活化菌种接种于种子培养基，在25~35℃、摇床转数100~200r/min条件下培养12~36小时得到种子液；所述种子培养基配方为：葡萄糖5~50g/L，酵母膏5~40g/L，KH₂PO₄ 0.5~5g/L，NaCl 0.5~5g/L，溶剂为水，初始pH为5.0~8.0；

 (3) 发酵培养：将种子液按照体积比1~5%接入发酵培养基，在25~35℃、摇床转数100~200r/min条件下培养12~48小时，将培养液离心、洗涤，收集含酶湿菌体，冷藏备用；所述发酵培养基配方为：葡萄糖5~50g/L，酵母提取粉5~100g/L，KH₂PO₄ 0.5~5g/L，NaCl 0.5~5g/L，CuCl₂ 0.01~0.1g/L，溶剂为水，初始pH为5.0~8.0。