[发明专利]一种植物乳杆菌定量检测方法及其检测试剂盒和应用

权利要求书

1.一种植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）定量检测方法，其特征在于，所述植物乳杆菌定量检测方法包括以下步骤：

（1）提取待检样品的总RNA；

（2）将步骤（1）提取的总RNA反转录成cDNA；

（3）采用特异性扩增植物乳杆菌的引物对，以步骤（2）所得cDNA为模板，进行荧光定量PCR扩增检测，其中所述特异性扩增植物乳杆菌的引物对为：上游检测引物，其序列如序列表中SEQ ID No:1所示；下游检测引物，其序列如序列表中SEQ ID No:2所示；

（4）通过比较待检样品的Ct值和定量外标准品的标准曲线测定样品中植物乳杆菌的数量。

2.如权利要求1所述植物乳杆菌定量检测方法，其特征在于，步骤（3）所述荧光定量PCR扩增程序为：（1）94℃～95℃，25～30秒；（2）94℃～95℃，5～15秒，（3）60℃，20～30秒，其中步骤（2）～（3）重复30～45个循环。

3.如权利要求1所述植物乳杆菌定量检测方法，其特征在于，步骤（4）所述植物乳杆菌选自植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）ST-III、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）WCFS1、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）P8和植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）CCTCC No.M206033中的一种或几种。

4.如权利要求1所述植物乳杆菌定量检测方法，其特征在于，步骤（4）所述的定量外标准品是植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）ATCC14917的总RNA反转录后所得的总cDNA，其中所述标准曲线是将外标准品采用10倍梯度稀释，以稀释后的外标准品作为底物进行荧光定量PCR反应得到Ct值，根据稀释后标准品的拷贝数和其相对应的Ct值绘制而得。

5.一种特异性扩增植物乳杆菌的引物对，其特征在于，所述引物对中的上游检测引物的序列如序列表中SEQ ID No:1所示；其中下游检测引物的序列如序列表中SEQ ID No:2所示。

6.一种植物乳杆菌定量检测试剂盒，其特征在于，所述定量检测试剂盒包括：SYBR Green I荧光染料、PCR缓冲液、dNTPs溶液、DNA聚合酶、无菌双蒸水、上游检测引物和下游检测引物，其中所述上游检测引物的序列如序列表中SEQ ID No:1所示，所述下游检测引物的序列如序列表中SEQ ID No:2所示。

7.如权利要求6所述植物乳杆菌定量检测试剂盒，其特征在于，所述植物乳杆菌定量检测试剂盒包括定量外标准品。

8.如权利要求7所述植物乳杆菌定量检测试剂盒，其特征在于，所述定量外标准品是植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）ATCC14917的总RNA反转录后所得的cDNA。

9.如权利要求8所述植物乳杆菌定量检测试剂盒，其特征在于，所述植物乳杆菌定量检测试剂盒还包括RNA提取试剂和/或反转录试剂。

10.如权利要求6～9任一项所述的植物乳杆菌定量检测试剂盒在检测植物乳杆菌数量中的应用。