[发明专利]一种尿液中肌酐的液相色谱串联质谱测定方法

权利要求书

1.一种尿液中肌酐的液相色谱串联质谱测定方法，其特征在于：包括以下工艺步骤：

a、收集志愿者尿液；

b、样品前处理：室温下解冻尿液样品，混合均匀后，取1 mL的尿液并加入10 μL的甲酸酸化到pH=2.5左右，在10000 转/min的条件下离心10 min，离心的混合物过0.22 μm聚醚砜水相滤膜，取5 μL滤液于10 mL棕色容量瓶，加入100 μL浓度为1 μg/mL的肌酐-d3，用纯水定容至刻度；

c、标准工作液的配制：用纯水配制不同浓度的肌酐标准工作溶液

d、液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）测定，吸取配制好的不同浓度的肌酐标准工作溶液，注入LC-MS/MS系统，肌酐的线性回归方程为y=0.0106x+0.00615，其中Y代表分析物与内标峰面积的比值，X表示尿液中目标分析物的浓度，相关系数大于0.999，对样品待测液进行测定，测得分析物与内标峰面积的比值，代入一元线性回归方程，求得样品待测液中分析物的含量。

2.根据权利要求1所述的尿液中肌酐的液相色谱串联质谱测定方法，其特征在于：步骤b中的稀释过程依次加入的肌酐-d3和离心过滤后的尿液的体积分别为100 μL和5 μL。

3.根据权利要求1所述的尿液中肌酐的液相色谱串联质谱测定方法，其特征在于：在步骤d中，所述的色谱分析条件采用Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱色谱柱，初始流动相体系选取50% 溶剂A（0.1% 乙酸水溶液）和50% 溶剂B（0.1% 乙酸甲醇溶液），分析时间为12 min，进样量为5 μL。

4.根据权利要求3所述的尿液中肌酐的液相色谱串联质谱测定方法，其特征在于：采用色谱柱分析时，选取的洗脱条件：50%0.1% 乙酸水溶液和50%的0.1% 乙酸甲醇溶液等度洗脱，流动相流速为200 μL/min。

5.根据权利要求1所述的尿液中肌酐的液相色谱串联质谱测定方法，其特征在于：串联质谱检测器的条件：电喷雾离子源，多反应监测正离子扫描方式；电喷雾电压为5000V, 雾化气为40 psi, 气帘气的量为30 psi, 辅助加热气的流速为40 psi, 离子源温度为480 oC，射入电压：10 V, 碰撞能：29 eV； 去簇电压：73 V，驻留时间：100 ms。