[发明专利]一种器官型人工皮肤、其制备方法及应用

权利要求书

1.一种器官型人工皮肤，其由包括以下成分的生物材料构建而成：成纤维细胞、脱细胞羊膜、基质材料及角质形成细胞。

2.一种器官型人工皮肤，其由包括以下成分的生物材料构建而成：成纤维细胞、羊水干细胞、基质材料及角质形成细胞。

3.根据权利要求1或2所述的人工皮肤，其特征在于其中所述成纤维细胞为分离自哺乳动物皮肤的成纤维细胞，优选人源成纤维细胞，包括分离的原代幼儿皮肤成纤维细胞、成人皮肤成纤维细胞和幼儿包皮成纤维细胞，最优选幼儿包皮成纤维细胞。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的人工皮肤，其特征在于其中所述基质材料为亲水性高分子材料，所述亲水性高分子材料优选地由天然的或合成的细胞外基质蛋白形成。

5.根据权利要求4所述的人工皮肤，其特征在于所述细胞外基质蛋白选自纤维连接蛋白、层粘连蛋白、I型胶原蛋白、III型胶原蛋白、IV型胶原蛋白、玻璃粘连蛋白或其组合，优选是合成的细胞外基质蛋白，更优选是人重组III型胶原蛋白或人重组IV型胶原蛋白。

6.根据权利要求2-5中任一项所述的人工皮肤，其特征在于所述羊水干细胞分离自哺乳动物孕期羊水，优选哺乳动物孕中期的羊水，经体外培养而得。

7.一种器官型人工皮肤的制备方法，该方法包括以下步骤：

1)将体外培养的成纤维细胞按照1×10⁵～5×10⁵个细胞/cm³的密度种植在分离自哺乳动物胎盘的脱细胞羊膜上加入培养基培养2～4天构建成仿真皮层；

2)在所述仿真皮层上面覆盖一层厚度约1mm的基质材料；

3)待基质材料凝固后，将角质形成细胞按照1×10⁵～5×10⁵个细胞/cm³的密度接种于基质材料上，通过气液交界培养直至角质形成细胞角质化。

8.一种器官型人工皮肤的制备方法，该方法包括以下步骤：

1)收集雌性哺乳动物的孕期羊水，优选哺乳动物孕中期羊水，分离羊水干细胞，选择生长状态良好且细胞表面上干细胞基因标志物表达阳性的羊水干细胞与胶原蛋白液混合形成膜状凝胶；

2)将体外培养的成纤维细胞按照1×10⁵～5×10⁵个细胞/cm³的密度种植在步骤1)获得的膜状凝胶上，并加入培养基培养2～4天构建成仿真皮层；

3)在所述仿真皮层上面覆盖一层厚度约1mm的基质材料；

4)待基质材料凝固后，将角质形成细胞按照1×10⁵～5×10⁵个细胞/cm³的密度接种于基质材料上，通过气液交界培养直至角质形成细胞角质化。

9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于所述基质材料为亲水性高分子材料，所述亲水性高分子材料优选地由天然的或合成的细胞外基质蛋白形成，所述细胞外基质蛋白优选地选自纤维连接蛋白、层粘连蛋白、I型胶原蛋白、III型胶原蛋白、IV型胶原蛋白、玻璃粘连蛋白或其组合，更优选是合成的细胞外基质蛋白，最优选人重组III型胶原蛋白或人重组IV型胶原蛋白。

10.根据权利要求1-6中任一项所述的器官型人工皮肤在制备开放性创面用皮肤替代物或临时覆盖物的用途，所述开放性创面优选是烧伤创面，或因创伤或手术引起的皮肤缺损创面。