[发明专利]检测红脂大小蠹的方法及检测试剂盒有效
| 申请号： | 201210585103.X | 申请日： | 2012-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN103146811A | 公开（公告）日： | 2013-06-12 |
| 发明（设计）人： | 石娟;陈芳;骆有庆;李建光;赵汗青;宗世祥 | 申请（专利权）人： | 北京林业大学;中华人民共和国北京出入境检验检疫局 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王朋飞;张庆敏 |
| 地址： | 100083 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 大小 方法 试剂盒 | ||
1.一种用于检测红脂大小蠹（Dendroctonus valens LeConte）引物组合，其特征在于，其能够特异地扩增COI基因或其特异性片段。
2.如权利要求1所述的引物组合，其特征在于，第1对引物为通用引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1~2所示；第2对引物为特异性引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3~4所示。
3.含有权利要求1或2所述的引物组合的试剂盒。
4.含有权利要求1或2所述的引物组合的检测试剂。
5.一种检测红脂大小蠹的方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）提取昆虫基因组DNA；
（2）以基因组DNA为模板，使用权利要求2所述的通用引物进行第一轮PCR，扩增目的条带为709bp；
（3）以第一轮PCR产物按1:50~100稀释后的产物为模板，使用权利要求2所述的特异性引物进行第二轮PCR扩增目的条带为594bp，则结果为阳性。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，第一步PCR中，其25μL总工作体系为：
7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，第一步PCR反应条件为：94℃预变性5min，1个循环；94℃变性30s，53.7℃退火45s，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸7min。
8.如权利要求5所述的方法，其特征在于，第二步PCR中，其25μL总工作体系为：
9.如权利要求5所述的方法，其特征在于，第二步PCR反应条件为：94℃预变性5min，1个循环；94℃变性30s，58℃退火45s，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸7min。
10.权利要求5~9任一所述的方法在植物保护中的应用。
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