[发明专利]一种利用多重PCR技术分析花生粕中黄曲霉毒素B1产生趋势的方法

权利要求书

1.一种利用多重PCR技术分析花生粕中黄曲霉毒素B₁产生趋势的方法，其特征在于提取样品花生粕的基因组DNA后，通过多重PCR扩增黄曲霉毒素B₁合成基因，通过PCR结果判断花生粕产生黄曲霉毒素B₁的趋势，用于指导花生粕的储藏和运输条件控制。

2.根据权利要求1所述的一种利用多重PCR技术分析花生粕中黄曲霉毒素B₁产生趋势的方法，其特征在于所述样品花生粕采用缩分法取样，最终样品的重量为0.1g。

3.根据权利要求1所述的一种利用多重PCR技术分析花生粕中黄曲霉毒素B₁产生趋势的方法，其特征是该方法包括以下步骤：

（1）将花生粕进行液氮研磨预处理，用土壤DNA抽提试剂盒提取花生粕基因组DNA，得到的粗DNA用核酸蛋白定量仪检测后存于﹣20℃备用；

（2）以提取的DNA为模板，用4组引物进行PCR扩增，得到PCR产物，所述4组引物为4对引物序列，第一组引物的正向序列如序列表中SEQ ID -1F所示，第一组引物反向序列则具有表中SEQ ID -1R的碱基序列；第二组正向、反向的序列分别对应于序列表中的SEQ ID -2F和SEQ ID -2R的碱基序列；第三组正向、反向的序列分别对应于序列表中的SEQ ID -3F和SEQ ID -3R的碱基序列；第四组正向、反向的序列分别对应于序列表中的SEQ ID -4F和SEQ ID -4R的碱基序列；

引物名称序列产物大小序列表中的序列号aflRFTATCTCCCCCCGGGCATCTCCCGG24SEQ ID -1FaflRRCCGTCAGACAGCCACTCCACACGG24SEQ ID -1Romt-1FGTGGACGGACCTAGTCCGACATCAC25SEQ ID -2Fomt-1RGTCGGCGCCACGCACTGGGTTGGGG25SEQ ID -2Rver-1FGCCGCAGGCCGCGGAGAAAGGTGGT25SEQ ID -3Fver-1RCCGCAGTCAATGGCCATGCAGCG23SEQ ID -3RITSFTCCGTAGGTGAACCTGCGG19SEQ ID -4FITSRTCCTCCGCTTATTGATATGC20SEQ ID -4R

    （3）PCR产物用琼脂糖凝胶电泳检测，根据PCR产物电泳条带的数目，判定花生粕中是否感染黄曲霉毒素产生菌，其中：

当PCR产物有0，1，2,或3个条带时，判定花生粕未感染黄曲霉毒素产生菌；当PCR产物有4个条带时，判定花生粕感染了黄曲霉毒素产生菌，根据条带的丰度确定黄曲霉毒素产生的趋势。