[发明专利]制备油菜花粉有效物质富集物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种由油菜花粉制备油菜花粉有效物质富集物的方法，所述富集物富含黄酮化合物和中等极性含氮化合物，可以用作治疗良性前列腺增生疾病的原料药。

背景技术

油菜花粉为十字花科植物油菜(Brassica campestris L.)的花粉粒，具有多种营养成分，除了糖、蛋白质、氨基酸、矿物质和维生素等营养成分之外，还包括脂肪酸类、多酚类(包括黄酮类)、植物甾醇类、含氮类等次生代谢产物，它们(分为小极性和中等极性活性组分)通过作用于不同靶点发挥其抗良性前列腺增生的药理作用(孙毅，杨义芳，杨必成，陈琼珊.油菜蜂花粉生理活性及作用机制研究进展[J].中国蜂业，2010，61(9)：5-9；杨必成，杨义芳.花粉治疗前列腺疾病的物质基础研究进展[J].中草药，2009，40(1)：144-145)。其中，中等极性活性组分中起主要药效作用的成分为黄酮类和含氮类化合物。目前，针对这两类成分的抗良性前列腺增生体外活性和作用机制有了部分报道(韩慧英.前列康及其原料油菜花粉活性成分的研究[D].沈阳：沈阳药科大学，2004；杨义芳，金丽丽，杨必成，黄春跃，李坤.一类香豆酰精脒类化合物或其植物提取物的应用[P].中国专利：200910049133.7.2009-04-10)，对油菜花粉中黄酮的富集工艺也有专利公开和报道，但其步骤较复杂且所得黄酮回收率较低，应用于大规模生产的可行性较小。最后也是最重要的是，同时对黄酮类和含氮类化合物进行富集工艺的研究未见任何相关专利和报道。

发明内容

本发明提供一种由油菜花粉制备抗良性前列腺增生的油菜花粉有效物质富集物的方法，该方法通过提取工艺得到油菜花粉浸膏，再通过大孔树脂柱层析工艺得到有效物质富集物，显著提高活性成分黄酮和中等极性含氮化合物的含量，因此能更好地满足作为创新中药药物原料的要求。

因此，本发明的第一个目的是提供一种制备油菜花粉有效物质富集物的方法，包括如下步骤：

(1)破壁油菜花粉(Brassica campestris L.pollen)经水提取以及CO₂超临界提取后得到油菜花粉残渣；

(2)所述残渣经乙醇水溶液渗漉，得到浸膏；

(3)所述浸膏经大孔树脂吸附，用不同浓度乙醇洗脱，得油菜花粉有效物质富集物。

本发明所提到的破壁油菜花粉可以在市面上购得或者采用现有的破壁技术(专利申请公开号CN1452888A的酶发酵破壁方法)制得。并且经过充分干燥。

根据本发明一个优选的实施方式，步骤(1)所述水提取包括如下步骤：

粉碎破壁油菜花粉后，与蒸馏水以1∶1-1∶8(w/w)比例混合，27-70℃下搅拌0.5-8h后，以3000-6000r/min离心30-120min，弃去上清液，沉淀置于40-80℃微波干燥，使含水量为2-4％(w/w)，粉碎并过筛，得花粉渣。

根据本发明另一个优选的实施方式，步骤(1)所述CO₂超临界提取包括如下步骤：

花粉渣置于CO₂超临界萃取设备，萃取温度30-50℃，压力20-40MPa，CO₂流量20-30L/h；分离釜I：压力4.0-8.0MPa，温度30-45.0℃；分离釜II：压力4.0-6.0MPa，温度30-45.0℃；萃取时间60-120min，取出提取后花粉残渣，粉碎，过筛，得残渣。

根据本发明一个优选的实施方式，步骤(2)所述乙醇水溶液渗漉包括以下步骤：首先用固液比(g/mL)为1∶1.5-1∶2的70-95％(v/v)乙醇浸泡残渣12-60h，用固液比(g/mL)为1∶15-1∶25的70-95％(v/v)乙醇渗漉，流速为3-15mL/min/100g残渣，收集渗漉液；然后用固液比(g/mL)为1∶1.5-1∶2的70-95％(v/v)乙醇浸泡残渣12-60h，用固液比(g/mL)为1∶15-1∶25的70-95％(v/v)乙醇渗漉，流速为3-15mL/min/100g残渣，收集渗漉液，合并两次所得渗漉液，减压浓缩蒸干。

根据本发明另一个优选的实施方式，进行以下黄酮和中等极性含氮化合物富集步骤：将步骤(2)所得浸膏以1∶130-1∶140(w/w)的比例分散至水中，经大孔树脂吸附，先用30-50％(v/v)乙醇水溶液洗脱，洗脱体积为6-12倍柱体积，弃之；再用60-80％(v/v)乙醇水溶液洗脱，洗脱体积为6-12倍柱体积，收集洗脱液，减压蒸馏浓缩，干燥，得油菜花粉有效物质富集物。