[发明专利]枯草芽孢杆菌fla基因编码序列及转基因植物育种方法

权利要求书

1.一种枯草芽孢杆菌fla基因重组载体是通过以下方法构建而成：

(1)fla基因序列：如序列表SEQ ID NO.1所示

(2)以fla基因作为目的基因构建在植物表达的Ti-质粒双元载体pCMBIA1300上：用于构建双元转化表达载体的质粒是由T-DNA改造而来，其中除T-DNA 25bp重复序列(LB和RB)，真核生物表达的花椰菜花叶病毒的启动子35S(p35S)和终止子外，还有在原核生物(细菌)中作为选择标记使用的nptI和在真核生物(植物)中作为选择标记使用的hptII。用于选择的抗生素均为Km和HYG；作为目的基因使用的fla基因插入在pCMBIA1300质粒的多克隆酶切位点上，所用内切酶为BamHI，即获得基因重组载体。

2.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌fla基因重组载体，其特征在于，所述Ti-质粒双元载体指的是Ti-质粒双元载体pCMBIA1300。

3.根据权利要求1或2所述的水稻fla基因重组载体，其转基因植物育种的方法为：将构建的双元转化重组载体质粒pCMBIA1300::fla直接转化于含vir区辅助质粒、不带卡那霉素抗性的pTiBo542衍生质粒的感受态根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105中。

1)转化植物细胞：同时含有辅助质粒pTiB0542(Kms)和转化质粒(pCMBIA1300::fla)的根癌土壤杆菌EHA105用于植物细胞的转化，方法为叶碟法、胚转化法。

2)外植体在植物再生培养基中筛选被转化的再生植株(T₀代)：T₁代种子催芽时用50mg/L潮霉素浸泡12小时进行筛选转化植株，对T₁代植株按株系检测转化频率以及植株中fla基因的表达筛选被转化的再生植株；

3)转化株系的检测：用PCR检测转化植株叶片中fla基因，fla基因的表达用定量RT-PCR方法检测植株叶片中fla基因的RNA的积累，即获得转化株系。

4.根据权利要求3所述的枯草芽孢杆菌fla基因重组裁体转基因植物育种的方法，其特征在于：用农杆菌介导感染法获得转基因品系。