[发明专利]青枯病菌培养基及青枯病菌电激感受态细胞的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于农业病虫害防治领域，具体是涉及一种青枯病菌培养基及青枯病菌电激感受态细胞的制备方法。

背景技术

青枯病是茄科植物上由茄科雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）引起的一种世界范围的细菌性土传病害，广泛分布于热带、亚热带及温带地区。青枯病菌具有广泛的寄主，可侵染50多个科的200余种植物，植物一旦感染这种病原菌后，会造成作物的大量减产。由于“温室效应”所引起的全球气候变暖，该病原菌呈现出向高纬度地区蔓延的趋势，给作物生产带来极大的危害。青枯病是一种维管束病害，在作物的整个生长期都可发生，现蕾开花期症状最明显，特别是温暖潮湿、雨水充沛的环境发病尤为严重。病原菌侵害植株的维管束，使茎基部和根维管束变褐色，尤其是导管部分变褐甚至腐烂。感病的块茎切开后，可见维管束呈褐色，切面不需挤压即可溢出白色菌脓，这也是判断得此病的标准。

在生产上对于青枯病目前还没有很好的防治措施。化学药剂及农业综合防治效果都不明显，化学药剂防治一方面提高了生产成本，另一方面也对环境造成污染；农业综合防治费时费力，难以推广。因此，深入了解青枯病菌的致病机理，对有效防止和控制青枯病的发生有很大的帮助。研究青枯病菌的致病机理的关键是获得无致病能力的突变菌株，目前最佳的方法是通过转座子进行青枯病菌致病菌株基因组的突变，进行转座子突变的前提条件是获得具有较高转化效率的青枯病菌株的感受态细胞。

发明内容

本发明的目的在于提供一种青枯病菌培养基及青枯病菌电激感受态细胞的制备方法，以便获得具备较高电激转化效率的青枯病菌感受态细胞。

本发明的技术方案是，一种青枯病菌培养基，固体，每1升培养基中，各组分及含量为：500克新鲜马铃薯浸出液；Ca(NO₃)₂.4H₂O 1.0克；Na₂HPO₄.12H₂O 2.0克；蛋白胨5.0克；酵母浸出物1克；蔗糖15克；琼脂15克。

前面所述的青枯病菌培养基，优选的方案是，pH值6.8。

前面所述青枯病菌培养基的制备方法，步骤如下：

（1）取新鲜马铃薯（优选的，所用新鲜马铃薯为500克）切丁（优选1厘米见方的丁），放到盛有蒸馏水的烧杯（优选盛有800毫升蒸馏水的1升烧杯）中加热至沸腾后，自然冷却至室温，用尼龙网（优选200目的尼龙网）过滤得马铃薯浸出液，弃掉马铃薯块；

（2）将Ca(NO₃)₂.4H₂O、Na₂HPO₄.12H₂O、蛋白胨、酵母浸出物、蔗糖依次加入到马铃薯浸出液中，用蒸馏水定容到1升，调节pH值至6.8（优选的，用盐酸或氢氧化钾调节pH值）；

（3）用三角瓶（优选500毫升的三角瓶）进行分装（优选的，各取200毫升培养基进行分装）为5瓶，每瓶加入琼脂3克，制作成固体培养基。

一种青枯病菌培养基，液体，每1升培养基中，各组分及含量为：500克新鲜马铃薯浸出液；Ca(NO₃)₂.4H₂O 1.0克；Na₂HPO₄.12H₂O  2.0克；蛋白胨5.0克；酵母浸出物1克；蔗糖15克。

所述的青枯病菌培养基，pH值6.8。

前面所述青枯病菌培养基的制备方法，步骤如下：

（1）取新鲜马铃薯（优选的，所用新鲜马铃薯为500克）切丁（优选1厘米见方的丁），放到盛有蒸馏水的烧杯（优选盛有800毫升蒸馏水的1升烧杯）中加热至沸腾后，自然冷却至室温，用尼龙网（优选200目的尼龙网）过滤得马铃薯浸出液，弃掉马铃薯块；

（2）将Ca(NO₃)₂.4H₂O、Na₂HPO₄.12H₂O、蛋白胨、酵母浸出物、蔗糖依次加入到马铃薯浸出液中，用蒸馏水定容到1升，调节pH值至6.8（优选的，用盐酸或氢氧化钾调节pH值）；

（3）用三角瓶（优选500毫升的三角瓶）进行分装（优选的，各取200毫升培养基进行分装）为5瓶。

本发明还提供了一种青枯病菌电激感受态细胞的制备方法，步骤如下：