[发明专利]治疗乙型病毒性肝炎的RNA干扰制剂

说明书

技术领域

本发明是利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制乙型肝炎病毒的复制。

背景技术

双链RNA（dsRNA）抑制蛋白的表达，沉默基因，具有广泛的、潜在的治疗人类疾病的用途。dsRNA诱导基因沉默有三种方式：1、转录功能的失活，这一现象是指RNA指导下的DNA或组蛋白甲基化；2、小干扰核酸（small interfering RNA,siRNA）诱导的信使RNA(mRNA)的降解；3、RNA介导的转录功能的衰减。但一般认为dsRNA诱导的基因干扰（抑制）指的是动物细胞内的RNA降解。化学合成的的小分子RNA，如siRNA，能够在亚微摩尔浓度中，酶催化下降解细胞内的mRNA达95%以上。

RNAi的效果能够持续很长时间，甚至持续至几代细胞分裂，同时基因干扰是序列特异性的抑制。所以，RNAi能特异性的抑制基因表达，而不影响它异构体或其他的mRNA，这种特异性的抑制在研究基因功能和药物靶点的签定有特别重要作用。siRNA能够用于开发成药物治疗：1、由于基因过度表达或正常下不表达的基因；2、突变的基因而引起的疾病。

医学应用

RNAi能应用于开发不同于小分子和蛋白的新一类药物，虽然长的dsRNA引起细胞的干扰素反应，不能直接传递到细胞，但siRNA的应用还是比较成功的。已经成功的广泛应用于研究并已进行了临床试验。

应用于治疗方面，首先是用于老年性黄斑性病变和呼吸道合胞病毒。其它报道的治疗的疾病，包括抗病毒HIV，甲、乙、丙型肝炎、感冒和麻疹等；治疗神经性退行性病变，特别是亨廷顿氏病，如多聚谷氨酰胺疾病也有报道。RNAi也可以通过抑制过度表达的基因遏制肿瘤细胞的分裂，治疗癌症。然而，一个非常重要的领域是开发一个安全的siRNA传递技术，才能保证RNAi的临床应用。

尽管细胞水平的研究表明RNAi是一个非常有前途的药物开发平台，siRNA的脱靶效应，是否可引起一些副作用也同时引起了注意，因为脱靶效应可抑制与靶基因相似序列的基因。据计算，脱靶效应可达10%。在哺乳细胞，长的双链siRNA可诱导干扰素反应。因此，siRNA或者iNA（interferring nucleic acid,干扰核酸）必须保持短的序列，以避免干扰素反应。

能够设计一个siRNA或iNA没有干扰素反应最好的一个方法是设计一个治疗性的iNA或siRNA能作用于一个或一个以上的靶基因，或一个靶基因的不同部位，它的结构可是一个方向，或不同方向，环形的，类似环形的、或直线型的。这几种类型iNA or siRNA与常用的siRNA的结构不同。

据估计，乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）感染的人口约高达20亿人-世界人口的三分之一，超过350万人会转为慢性感染。据报道，15～40％的HBV感染的患者会发展为肝硬化，肝衰竭或肝癌（HCC），每年有50万至120万人死于HBV感染。HBV在美国的患病率估计为约0.4％。然而，自愿抽检数据表明在某些外国出生的少数族裔群体患病率超过15％。在20世纪90年代，乙肝病毒相关的诊断门诊和住院治疗人数增加好几倍。同样，住院总费用估计已经从1990年的3.57亿美元增加至2003年的15亿美元，然后保持在13亿美元。

治疗HBV的最终目标是抑制或消除HBV，缓和或停止HBV感染引起的肝损伤，防止肝功能衰竭和肝癌的发展。最重要短期和中期治疗目标是最大限度地提高HBV DNA抑制率。但是，彻底根除B型肝炎病毒是困难的，因为它整合到宿主基因组中，产生继续作为潜在复发倾向的cccDNA。聚乙二醇干扰素α-2a（PEG－IFN-α）和干扰素α-2a（IFN-α），核苷类药物（拉米夫定，恩替卡韦和替比夫定）和核苷酸类似物（阿德福韦和替诺福韦）是FDA批准的抗HBV药物市场上常用的药物。干扰素治疗的主要缺点是其显著的副作用，限制其长期使用。它对失代偿期肝硬化与转氨酶正常患者往往是无效的。此外，只有三分之一的患者对PEG-IFN-α抗病毒有效。虽然核苷（酸）类似物抑制HBV复制并能使肝脏坏死性炎症减少，但不能完全根除病毒。此外，停药后，多数患者观察到病毒血症的反弹。此外，长期治疗产生耐药HBV病毒株，导致治疗失败。

RNAi是细胞内调节基因的活性过程。它曾被称为其他名称，包括转录后基因沉默（PTGS），2006年，Andrew Fire and Craig C.Mello共同获得诺贝尔生理学或医学奖，以表彰他们1998年发表的文章，文章描述了他们在线虫研究中发现的RNAi现象。