[发明专利]一种齐考诺肽及其杂质的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于有效分离和分析齐考诺肽及其杂质的高效液相色谱（HPLC）方法。

背景技术

齐考诺肽(Ziconotide)是一种钙离子通道抑制剂，具有镇痛的作用。齐考诺肽对那些使用阿片类及非甾体类镇痛剂无效的严重慢性疼痛患者会产生显著的镇痛作用，而且不会让人上瘾和产生抗药性。

专利CN101709082中提及了一种固相合成齐考诺肽的制备工艺。在齐考诺肽的化学合成过程中，存在几个关键的中间步骤，所以在最终产品中可能残留相应的中间体，因此建立分离分析方法对其中间体及杂质进行质量控制是非常必要的。

齐考诺肽及其杂质的结构如下：

1）齐考诺肽

Cys-Lys-Gly-Lys-Gly-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Cys-Cys-Thr-Gly-Ser-Cys-Arg-Ser-Gly-Lys-Cys-NH2,[二硫键（Disulfidebridges）:1-16,8-20,15-25]

2）杂质A

H-Cys-Lys-Gly-Lys-Gly-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asn-Cys-Cys-Thr-Gly-Ser-Cys-Arg-Ser-Gly-Lys-Cys-NH2[二硫键:1-16,8-20,15-25]

2）杂质B

H-Cys-Lys-Gly-Lys-Gly-Ala-Lys-Cys-D-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Cys-Cys-Thr-Gly-Ser-Cys-Arg-Ser-Gly-Lys-Cys-NH2[二硫键:1-16,8-20,15-25]

3）杂质C

D-Cys-Lys-Gly-Lys-Gly-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Cys-Cys-Thr-Gly-Ser-Cys-Arg-Ser-Gly-Lys-Cys-NH2[二硫键:1-16,8-20,15-25]

4）杂质D

H-Cys-Lys-Gly-Lys-Gly-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-γ-Asp-Cys-Cys-Thr-Gly-Ser-Cys-Arg-Ser-Gly-Lys-Cys-NH2[二硫键:1-16,8-20,15-25]

5）杂质E

H-Cys-Lys-Gly-Lys-Gly-Ala-Lys-Cys-Ser-D-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Cys-Cys-Thr-Gly-Ser-Cys-Arg-Ser-Gly-Lys-Cys-NH2[二硫键:1-16,8-20,15-25]

6）杂质F

H-Cys-Lys-Gly-Lys-Gly-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Cys-Cys-D-Thr-Gly-Ser-Cys-Arg-Ser-Gly-Lys-Cys-NH2[二硫键:1-16,8-20,15-25]

从以上各化合物结构来看，其结构非常相似，而从极性角度考虑，又有部分杂质与齐考诺肽存在较大的极性差异，因此要想在同一色谱柱上实现各组分的完全有效分离是非常困难的。

无疑，上述化合物在采用不同的色谱条件时，均可以单独的分离检测，但选用多个色谱条件分别分离检测在人力物力上都存在极大的浪费。因此，有必要寻找一种既能有效分离相似结构化合物又能有效检出弱极性物质的色谱条件。本发明人通过大量研究，发现了适宜的色谱条件，可有效的分离分析以上各化合物。

发明内容

本发明提供了一种分离分析齐考诺肽及各杂质的高效液相色谱法，从而实现对齐考诺肽与其中间体及杂质的分离和分析测定。

本发明所说的用高效液相色谱法分析分离齐考诺肽杂质及其最终产品的方法，是选用柱色谱法，以缓冲液与有机溶剂不同比例配制的流动相A、流动相B为流动相，梯度洗脱。用该方法可以快速有效的分离分析齐考诺肽和中间体及各杂质。

在一个实施方案中，所述方法中使用的流动相的流速为流速为0.8-1.2ml/min。在一个优选的实施方案中，所述流动相的流速为1.0ml/min。

在一个实施方案中，所述方法中使用的色谱柱的填料为十八烷基键合硅胶填料。