[发明专利]一种简化的可对放流中国对虾实现精确追溯的放流方法

说明书

技术领域

本发明属于海水动物放流领域，具体地涉及一种简便易操作地可实现对放流中国对虾个体精确追溯的放流方法。

背景技术

中国对虾（Fenneropenaeus chinensis）是我国特有的一年生大型经济虾类，主要分布在黄渤海沿岸海区，经济效益显著。二十世纪八十年代以来，由于捕捞强度的不断加大、生态变迁、水域污染、病害频发以及人工养殖业对野生中国对虾的盲目需求等综合因素的影响，中国对虾野生资源量急剧萎缩。为保护、恢复中国对虾种群和渔业资源，我国于1984年开始在特定海区进行中国对虾移殖/增殖放流，每年放流约30亿尾仔虾。经过连续多年的大规模种苗放流，中国对虾资源量得到了一定的恢复。不过由于无法准确区分回捕群体中放流个体和野生个体及数量，因而无法科学评估放流群体对野生资源的补充水平，分析野生资源的动态变化并制定科学的放流规划，这是中国对虾放流迫切需要解决的重大问题。衡量和评估放流效果的重要指标之一是放流回捕率估算，这是制定科学的放流规划、有效促进野生中国对虾种群资源恢复的重要指标。但是现有的检测方法由于存在各种缺陷而无法提供精确的回捕率，主要存在以下几个原因：1）回捕样品中无法准确区分放流和野生对虾个体；2）放流个体的物理标记过程操作繁琐、无法大规模进行，一般只对部分放流个体进行标记；3）物理标记对个体规格要求苛刻、标记后个体死亡率大，影响回捕率准确估算。因此，目前迫切需要一种技术对放流群体进行大批量标志，以此为中国对虾放流提供精确的回捕率数据。并且该技术应该具备以下特征：1）放流个体携带特有的标识系统，该系统可精确区分野生和人工放流个体；2）携带该标识系统的个体可以大批量培育并维系个体一生，不会对标识个体具有任何内在或物理伤害；3）该标识个体可被迅速鉴别并与其它个体区分开来；4）标识个体放流不会破坏或影响野生中国对虾群体资源结构。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种可对放流中国对虾实现精确追溯的放流方法，精确评估中国对虾放流效果，精确评估放流回捕率，推算野生群体资源量的目的，制定科学的放流规划、有效促进野生中国对虾种群资源恢复。

本发明所采用的放流效果评估方法符合放流检测所要具备的5个条件：1）具有确定遗传背景、不携带特定病原的中国对虾大规模多家系苗种培育；2）中国对虾荧光标记微卫星四重PCR个体/家系高效精确识别；3）携带特定DNA分子指纹图谱放流个体的标志放流；4）携带特定DNA分子指纹图谱放流个体的大规模检出；5）放流和野生资源及回捕率的精确计算。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种可对放流中国对虾实现精确追溯的放流方法，包括以下步骤：

每年放流季节，海捕野生交尾雌虾，并眼柄标记，然后进行苗种培育，产卵后的雌虾-75℃超低温冰箱保存备用；秋季，在各放流洄游点进行放流个体的捕捞取样，样品回捕后通过两组中国对虾荧光标记微卫星四重PCR个体识别技术检测回捕样本，并确定放流个体的数量，最终评估中国对虾的放流效果；

其中所述的中国对虾荧光标记微卫星四重PCR个体识别技术，第一组微卫星四重PCR引物组合及序列如下：

EN0033正向序列为：5′-6-FAM-CCTTGACACGGCATTGATTGG-3′，反向序列为：5′-TACGTTGTGCAAACGCCA AGC-3′；

RS0622正向序列为：5′-VIC-TCAGTCCGTAGTTCATACTTGG-3′，反向序列为：5′-CACATGCCTTTGTGTGAAAACG-3′；

FCKR002正向序列为：5′-NED-CTCAACCCTCACCTCAGGAACA-3′，反向序列为：5′-AATTGTGGAGGCGACTAAGTTC-3′；

FCKR013正向序列为：5′-PET-GCACATATAAGCACAAACGCTC-3′，反向序列为：5′-CTCTCTCGCAATCTCTCCAACT-3′；