[发明专利]用于降解脐橙囊衣微生物的培养基及酶制剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，具体而言，涉及一种用于降解脐橙囊衣微生物的培养基及酶制剂的制备方法。

背景技术

我国柑橘加工长期沿袭着人工剥皮和酸碱脱囊衣等传统工艺生产。现有酸碱法脱囊衣的酸碱处理法主要有：经典酸碱二步法、改良重酸二步法、磷酸盐NaOH一步法，以及EDTA或Na₂-EDTA（乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸二钠）为助剂的低碱去囊衣法。人工去皮和酸碱脱囊衣工艺存在劳动密集、生产效率低、产品质量不稳定等问题。目前工业化罐头生产脱囊衣耗水量大，每吨产品耗水量达60～80吨，不仅增加产品成本，而且加剧了饮用水资源的短缺。同时，因大量使用碱，产生大量的工业碱液废水，增加了产品的生产成本，也污染环境，影响了产品的安全性，容易遭遇技术壁垒和绿色壁垒，削弱了我国柑橘罐头工业在国际市场的竞争优势。同时，在柑橘加工生产中产生了约占柑橘加工量30%左右的皮渣，通常都被丢弃掉，不仅造成资源浪费，也给环境带来了污染。

脐橙加工中脱囊衣工艺是其主要技术难点之一。目前橙汁胞的生产技术主要采用传统柑橘罐头酸碱处理的工艺，存在人工剥皮、分瓣，生产效率低；酸碱囊衣用水量大，环境污染严重，产品安全性低；由于柑橘皮与脐橙皮结构的差异，导致现有的柑橘酶法去囊衣技术不适合于脐橙橙汁胞的加工。

发明内容

本发明旨在提供一种用于降解脐橙囊衣微生物的培养基及酶制剂的制备方法，以高效地制备降解脐橙囊衣微生物的酶制剂。

根据本发明的一个发明，提供一种降解脐橙囊衣酶制剂的制备方法。该制备方法包括：采用保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M 2012160的黑曲霉C-2（Aspergillus sp.C-2）作为发酵菌株，经过液体深层发酵或固态发酵培养制备得到降解脐橙囊衣酶制剂。

进一步地，液体深层发酵或固态发酵培养之前进一步包括活化、制备孢子悬浮液、种子培养的步骤。

进一步地，活化包括：将黑曲霉C-2接种于活化培养基中进行活化，活化培养基的pH值为7.0～7.2，活化温度控制在28℃～30℃，活化时间为1～2天；其中，活化培养基为以脐橙囊衣粉为碳源的固体斜面培养基，包括如下含量的组分：(NH₄)₂SO₄ 2g/L～2.5g/L、MgSO₄ 0.6g/L～1g/L、K₂HPO₄ 1g/L～2g/L、NaCl 1g/L～2g/L、脐橙囊衣粉6g/L～10g/L和琼脂15g/L～20g/L，并且在121℃温度下灭菌30min制得活化培养基。

进一步地，制备孢子悬浮液的步骤包括：采用无菌水洗下黑曲霉C-2的孢子，并稀释至2～3×10⁶个/mL制得孢子悬浮液，并将孢子悬浮液保存在4℃备用。

进一步地，种子培养包括：将孢子悬浮液接种于种子液体培养基中，控制种子液体培养基的pH值为7.0～7.2，培养温度控制在28℃～30℃，200r/m培养12～16h；或将孢子悬浮液接种于种子固体培养基中，控制种子固体培养基的初始pH值为6.5，培养温度控制在28℃～30℃，培养48h；其中，种子液体培养基为以脐橙囊衣粉为碳源的培养基，包括如下含量的组分：(NH₄)₂SO₄ 2g/L～2.5g/L、MgSO₄ 0.6g/L～1g/L、K₂HPO₄ 1g/L～2g/L、NaCl 1g/L～2g/L、脐橙囊衣粉或脐橙皮果渣15g/L～20g/L；并且在121℃温度下灭菌30min制得种子液体培养基。

进一步地，液体深层发酵培养的步骤包括：将经过种子培养的含黑曲霉C-2的种子液体培养基接种于发酵瓶中进行深层发酵培养，发酵培养条件为：12h内温度为30℃，12h后28℃；pH值为7.0～7.2；压力位0.06MPa～0.08MPa；搅拌速度12h内180r/m，12h后200r/m；通气量1:1.0～1.5；发酵时间108～120h，制得酶制剂。