[发明专利]用于降解脐橙囊衣微生物的培养基及酶制剂的制备方法

权利要求书

1.一种降解脐橙囊衣酶制剂的制备方法，其特征在于，采用保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M 2012160的黑曲霉C-2作为发酵菌株，经过液体深层发酵或固态发酵培养制备得到所述降解脐橙囊衣酶制剂。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述液体深层发酵或固态发酵培养之前进一步包括活化、制备孢子悬浮液、种子培养的步骤。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述活化包括：

将所述黑曲霉C-2接种于活化培养基中进行活化，所述活化培养基的pH值为7.0～7.2，活化温度控制在28℃～30℃，活化时间为1～2天；

其中，所述活化培养基为以脐橙囊衣粉为碳源的固体斜面培养基，包括如下含量的组分：(NH₄)₂SO₄ 2g/L～2.5g/L、MgSO₄ 0.6g/L～1g/L、K₂HPO₄ 1g/L～2g/L、NaCl 1g/L～2g/L、脐橙囊衣粉6g/L～10g/L和琼脂15g/L～20g/L，并且灭菌制得所述活化培养基。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述制备孢子悬浮液的步骤包括：

采用无菌水洗下所述黑曲霉C-2的孢子，并稀释至2～3×10⁶个/mL制得孢子悬浮液，并将所述孢子悬浮液保存备用。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述种子培养包括：

将所述孢子悬浮液接种于种子液体培养基中，控制所述种子液体培养基的pH值为7.0～7.2，培养温度控制在28℃～30℃，200r/m培养12～16h；或

将所述孢子悬浮液接种于种子固体培养基中，控制所述种子固体培养基的初始pH值为6.5，培养温度控制在28℃～30℃，培养24～48h；

其中，所述种子液体培养基为以脐橙囊衣粉为碳源的培养基，包括如下含量的组分：(NH₄)₂SO₄ 2g/L～2.5g/L、MgSO₄ 0.6g/L～1g/L、K₂HPO₄ 1g/L～2g/L、NaCl 1g/L～2g/L、脐橙囊衣粉或脐橙皮果渣15g/L～20g/L；并且在121℃温度下灭菌30min制得所述种子液体培养基。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述液体深层发酵培养的步骤包括：

将经过所述种子培养的含黑曲霉C-2的所述种子液体培养基接种于发酵瓶中进行液体深层发酵培养，液体深层发酵培养基同所述种子液体培养基，发酵培养条件为：12h内温度为30℃，12h后28℃；pH值为7.0～7.2；压力位0.06MPa～0.08MPa；搅拌速度12h内180r/m，12h后200r/m；通气量1:1.0～1.5；发酵时间108～120h，制得所述酶制剂。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述固态发酵培养的步骤包括：

经过所述种子培养的含黑曲霉C-2的所述种子固体培养基接种入固态发酵培养基中，30℃培养108h，得到黑曲霉C-2固态发酵曲，所述固态发酵曲通过低温干燥及粉碎后制得所述酶制剂，或通过0.5mol/L pH=6.5磷酸缓冲液中浸提获得所述酶制剂；

其中，所述固态发酵培养基通过以下方法制备：将麦麸95重量份、稻草秸秆粉90重量份、脐橙果渣或脐橙果皮粉90重量份、硫酸铵2重量份、硫酸镁0.5重量份、磷酸氢二钾1重量份加入水拌匀并调节水分湿度为60%，得所述固态发酵培养基。

8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，进一步包括：将所述酶制剂经过超滤、浓缩制得浓缩酶制剂，或将所述酶制剂制备成粉剂或颗粒剂。

9.一种用于降解脐橙囊衣微生物的培养基，其特征在于，所述培养基为以脐橙囊衣粉或脐橙皮果渣为碳源。