[发明专利]表达鸡毒支原体TM1蛋白的重组新城疫LaSota弱毒疫苗株

权利要求书

1.一种表达编码鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum，MG)TM1蛋白的重组新城疫LaSota弱毒疫苗，优选编码所述TM1蛋白的基因被插入在新城疫LaSota弱毒疫苗基因组中的P和M基因之间。

2.根据权利要求1的重组新城疫LaSota弱毒疫苗，其中所述鸡毒支原体TM1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

3.根据权利要求1或2的重组新城疫LaSota弱毒疫苗，其中所述编码鸡毒支原体TM1蛋白的基因序列是密码子优化后的序列，优选如SEQ ID No.2所示。

4.根据权利要求1-3中任何一项的重组新城疫LaSota弱毒疫苗，其中在TM1蛋白编码基因的3′端引入人组织型纤溶酶原激活因子(tPA)序列作为信号肽，优选所述tPA序列如SEQ ID No.3所示。

5.根据权利要求1-4中任何一项的重组新城疫LaSota弱毒疫苗，其为rLa-tPA-TM1。

6.根据权利要求1-5中任何一项的重组新城疫LaSota弱毒疫苗在制备预防鸡毒支原体引起的疾病和新城疫的双价疫苗中的应用。

7.一种生产权利要求1-5中任何一项的重组新城疫LaSota弱毒疫苗的方法，该方法包括：

(1)构建转录质粒，该转录质粒包括其中插入编码鸡毒支原体TM1蛋白的基因的所述新城疫LaSota弱毒疫苗的基因组cDNA序列；

(2)构建一个或多个转录辅助质粒，该辅助质粒包括编码所述新城疫LaSota弱毒疫苗的核蛋白(NP)的cDNA序列、编码所述新城疫LaSota弱毒疫苗的磷酸蛋白(P)的cDNA序列、和编码所述新城疫LaSota弱毒疫苗的大聚合酶蛋白(L)的cDNA序列；

(3)将所述转录质粒和转录辅助质粒共转染所述新城疫LaSota弱毒疫苗复制许可的宿主细胞，培养转染后的宿主细胞；

(4)收获上清液，过滤后继续敏感细胞传代或接种鸡胚尿囊腔救获重组病毒株。

8.根据权利要求7的方法，其中所述转录质粒是pBRN-FL-tPA-TM1，其序列如SEQ ID No.4所示。

9.根据权利要求7的方法，其中所述转录辅助质粒是质粒pBSNP、pBSP和pBSL。

10.根据权利要求7-9中任何一项的方法，其中所述宿主细胞是稳定表达T7聚合酶的细胞系。