[发明专利]一种金枪鱼碎肉蛋白抗氧化肽及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种金枪鱼碎肉蛋白抗氧化肽，本发明还涉及该金枪鱼碎肉蛋白抗氧化肽的制备方法，本发明还涉及该金枪鱼碎肉蛋白抗氧化肽的用途。

背景技术

抗氧化剂是一类可以阻止氧气不良影响，帮助捕获并中和自由基，从而祛除自由基对人体损害和保护食品免受氧化损伤变质的一类物质。抗氧化剂按照来源分为天然抗氧化剂和化学合成抗氧化剂两类。化学合成抗氧化剂（如丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）和特丁基对苯二酚（TBHQ）等）由于价格便宜、活性好，因而被广泛地应用到食品工业中阻止或延缓食品氧化变质、提高食品稳定性和延长食品贮存期。然而，世界卫生组织(FA0/WHO)、欧共体儿童保护组织(HACSG)、英国生物工业协会(BIBRA)、日本、美国的政府和组织的研究表明，合成抗氧化剂具有诸多副作用，如对人体的肝、脾、肺均有不利影响，会诱发恶性肿瘤等。所以美国食品药品管理局(FDA)建议在一般认为安全的物质中删去BHT；日本有关卫生部门经研究曾做出禁止使用BHA的结论；对于TBHQ，虽然美国等少数国家批准了它在某些油脂中的使用，但欧盟、日本等国家认为它的毒理试验资料不完善，尚未批准使用。因此，基于食品安全的考虑，化学合成抗氧化剂的应用受到了较大影响。事实也证明，在人们长期食用的食品中，天然抗氧化剂成分的毒性远远低于人工合成的抗氧化剂毒性。因此，近年来从自然界中寻求天然抗氧化剂的研究引起了各国科学家的高度重视。

目前，世界各国已从多种植物、动物组织中提取得到了多种抗氧化活性显著的物质，如茶叶中的茶多酚、大豆中的异黄酮、河蟹及虾外壳中的虾青素，枸杞中的多糖，蔬菜水果中的类胡萝卜素和抗坏血酸等物质。而已有的研究揭示，多肽类物质也具有显著的抗氧化活性，如存在于肌肉组织中的肌肽不仅可以有效抑制脂肪氧化，而且在肉制品贮藏时有护色作用；谷胱甘肽（GSH）亦具有抗氧化作用和整合解毒作用，并具有显著的抗氧化作用；而以生物蛋白为原料，采用酶解技术得到的蛋白酶解物及其组成多肽也具有显著的抗氧化活性，如Suetsuma等从酪蛋白的酶解产物中得到的纯度较高的六肽Tyr-Phe-Tyr-Pro-Glu-Leu具有显著的自由基清除作用；Chen Hua-Ming等从大豆酶解物中制备的五肽Leu-Leu-Pro-His-His具有很强的抗氧化活性；Ali Bougatef等从沙丁鱼蛋白酶解物中制备的三肽Leu-His-Tyr亦显示出显著的自由基清除活性；Seung-Jae Lee等从鸭皮酶解物中制备的八肽His-Thr-Val-Gln-Cys-Met-Phe-Gln亦显示出显著的自由基清除活性；陈宁等从胡桃酶解物中制备的四肽Ala-Asp-Ala-Phe表现出与谷胱甘肽（GSH）类似的抗氧化活性；王勇刚研究发现鱼精多肽中的二肽Pro-Arg可显著清除羟自由基，而且还可有效降低MRC-5（胚肺细胞）胞内自由基的含量，从而保护细胞避免氧化损伤。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是针对上述的技术现状提供一种金枪鱼碎肉蛋白抗氧化肽，该抗氧化肽安全无毒副作用，抗氧化活性强和易于消化吸收，可清除自由基和抑制脂质过氧化作用。

本发明所要解决的第二个技术问题是提供一种金枪鱼碎肉蛋白抗氧化肽的制备方法，工艺科学合理、易操作。

本发明所要解决的第三个技术问题是提供一种金枪鱼碎肉蛋白抗氧化肽的应用。

本发明为解决上述第一个技术问题所采取的技术方案为：一种金枪鱼碎肉蛋白抗氧化肽，其特征在于该抗氧化肽的氨基酸序列为Tyr-Glu-Asn-Gly-Gly  SEQ ID NO：1，HR-ESI-MS检测给出分子离子峰m/z 539.2096 Da[M+H]⁺。

本发明为解决上述第二个技术问题所采取的技术方案为：一种金枪鱼碎肉蛋白抗氧化肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）以脱脂金枪鱼碎肉作为原料，按固液比1 g:15mL ~ 25mL加入磷酸盐缓冲液（pH 5.5~6.5），用HCl或NaOH调节pH到5.0 ~ 7.0，得混合液；

2）将混合液温度升至55 ℃ ~ 65 ℃搅拌预热10 min ~ 15 min，按照脱脂鱼肉质量的1.0 % ~ 1.2 %加入木瓜蛋白酶，酶解温度为55 ℃ ~ 65 ℃，酶解时间1 h ~ 3 h，得酶解产物；

3）将制备的脱脂鱼肉蛋白酶解产物先经灭酶处理得金枪鱼碎肉蛋白酶解液，再将酶解液依次经脱盐、超滤和层析，得到抗氧化肽。