[发明专利]使用肠杆菌科细菌产生L-氨基酸的方法

权利要求书

1.一种用于产生L-氨基酸的方法，其包括：

A)在含有乙醇的培养基中培养具有醇脱氢酶的肠杆菌科的产生L-氨基酸的细菌，和

B)从培养基中分离L-氨基酸，

其中编码所述醇脱氢酶的基因在非天然启动子的调控下表达，所述启动子在有氧培养条件下有功能，并且

其中所述产生L-氨基酸的细菌是大肠杆菌或Pantoea ananatis。

2.根据权利要求1的方法，其中所述非天然启动子选自下组：P_tac、P_lac、P_trp、P_trc、P_R和P_L。

3.根据权利要求1或2的方法，其中所述醇脱氢酶对有氧失活有抗性。

4.根据权利要求1-3中任一项的方法，其中所述醇脱氢酶源于选自下组的细菌：大肠杆菌、胡萝卜软腐欧文氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、弗氏志贺氏菌、鼠疫耶尔森氏菌、Pantoea ananatis、植物乳杆菌和乳酸乳球菌。

5.根据权利要求1-4中任一项的方法，其中所述醇脱氢酶包含SEQ ID NO:2中所列的氨基酸序列，只是位置568的谷氨酸残基被替代为不是天冬氨酸残基的另一种氨基酸残基。

6.根据权利要求1-4中任一项的方法，其中所述醇脱氢酶包含SEQ ID NO:2中所列的氨基酸序列，只是位置568的谷氨酸残基被替代为赖氨酸残基。

7.根据权利要求5或6的方法，其中所述醇脱氢酶具有至少一个额外的突变，该突变能够改进所述细菌在含有乙醇作为唯一碳源的液体培养基中的生长。

8.根据权利要求7的方法，其中所述额外的突变选自下组：

A)用另一种氨基酸残基替代SEQ ID NO:2中位置560的谷氨酸残基；

B)用另一种氨基酸残基替代SEQ ID NO:2中位置566的苯丙氨酸残基；

C)用其它氨基酸残基替代SEQ ID NO:2中分别在位置22、236、461、554和786的谷氨酸残基、甲硫氨酸残基、酪氨酸残基、异亮氨酸残基和丙氨酸残基；和

D)以上各项的组合。

9.根据权利要求7的方法，其中所述额外的突变选自下组：

A)用赖氨酸残基替代SEQ ID NO:2中位置560的谷氨酸残基；

B)用缬氨酸残基替代SEQ ID NO:2中位置566的苯丙氨酸残基；

C)用甘氨酸残基、缬氨酸残基、半胱氨酸残基、丝氨酸残基和缬氨酸残基分别替代SEQ ID NO:2中分别在位置22、236、461、554和786的谷氨酸残基、甲硫氨酸残基、酪氨酸残基、异亮氨酸残基和丙氨酸残基；和

D)以上各项的组合。

10.根据权利要求1-9中任一项的方法，其中所述产生L-氨基酸的细菌属于选自下组的属：埃希氏菌属、肠杆菌属、欧文氏菌属、克雷伯氏菌属、泛菌属、普罗威登斯菌属、沙门氏菌属、沙雷氏菌属、志贺氏菌属和摩根氏菌属。

11.根据权利要求1-10中任一项的方法，其中所述L-氨基酸选自下组：L-苏氨酸、L-赖氨酸、L-组氨酸、L-苯丙氨酸、L-精氨酸、L-色氨酸、L-谷氨酸和L-亮氨酸。