[发明专利]一种免疫荧光组织化学技术

权利要求书

1.一种免疫荧光组织化学技术，其特征是包括以下步骤：

（1）初染

①、制备待测细胞或组织切片；

②、用H₂O₂/甲醇处理，降低内源性过氧化物酶所造成的非特异性背景；

③、暴露抗原结合位点；

④、封闭； 

⑤、同时或单独孵育待测细胞或组织切片中所含待测蛋白A的相应一抗和所含待测蛋白B的相应一抗， 

⑥、同时或单独孵育待测蛋白A的荧光素标记的二抗和待测蛋白B的荧光素标记的二抗；

⑦、DAPI初染；

⑧、普通荧光显微镜镜检、拍照，分析蛋白A和蛋白B在待测细胞或组织切片的表达情况；

（2）复染

①、利用磷酸盐缓冲液清洗进行初染后的待测细胞或组织切片，镜检观察至荧光消失；

②、重新封闭；    

③、孵育待测细胞或组织切片中所含待测蛋白C的相应一抗，然后孵育荧光素标记的二抗；

④、DAPI复染

⑤、普通荧光显微镜镜检、拍照，得到待测蛋白C的镜检照片，将其与初染得到的镜检照片进行叠加，进而在同一标本层面分析已测蛋白A、已测蛋白B和待测蛋白C的表达情况；

可以重复上述复染的步骤，分别得到待测细胞或组织切片中相关待测蛋白的镜检照片，然后在同一标本层面分别分析所有已测蛋白与待测蛋白的表达情况。

2.根据权利要求1所述的一种免疫荧光组织化学技术，其特征是复染时，采用的磷酸盐缓冲液pH值为7.4，每5分钟清洗一次，清洗3次。

3.根据权利要求1或2所述的一种免疫荧光组织化学技术，其特征是重新封闭时采用的封闭剂为正常山羊血清或牛血清白蛋白。

4.根据权利要求1或2所述的一种免疫荧光组织化学技术，其特征是复染时，重新封闭后，将已测蛋白A或已测蛋白B与待测蛋白C同时进行复染，普通荧光显微镜镜检，即可同时得到蛋白A或蛋白B与蛋白C的镜检照片，进而在同一标本层面直接分析蛋白A或蛋白B和待测蛋白C的表达情况。