[发明专利]6-氰基-（3R,5R）-二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法

权利要求书

1. 一种6-氰基-（3R,5R）-二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法，其以6-氰基-（5R）-羟基-3-氧代己酸叔丁酯为底物，该底物在生物催化剂、辅因子和辅因子再生系统的存在下发生还原反应生成6-氰基-（3R,5R）-二羟基己酸叔丁酯，其特征在于：所述的生物催化剂为酮还原酶，所述的辅因子再生系统包括葡萄糖和葡萄糖脱氢酶，所述的还原反应在pH为6~8的水相缓冲液中进行，在起始时的反应体系中，所述的底物6-氰基-（5R）-羟基-3-氧代己酸叔丁酯的浓度为350~400 mg/mL，所述的酮还原酶与所述的底物6-氰基-（5R）-羟基-3-氧代己酸叔丁酯的质量比为0.005~0.04:1。

2. 根据权利要求1所述的6-氰基-（3R,5R）-二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法，其特征在于：在起始时的反应体系中，所述的辅因子：所述的葡萄糖：所述的葡萄糖脱氢酶;所述的6-氰基-（5R）-羟基-3-氧代己酸叔丁酯的质量比为0.0005~0.002：0.9~1.8：0.01~0.04：1。

3. 根据权利要求1所述的6-氰基-（3R,5R）-二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法，其特征在于：所述的辅因子为NAD/NADH或NADP/NADPH。

4. 根据权利要求3所述的6-氰基-（3R,5R）-二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法，其特征在于：所述的辅因子为NADP/NADPH。

5. 根据权利要求1所述的6-氰基-（3R,5R）-二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法，其特征在于：所述的水相缓冲液为三乙醇胺盐酸缓冲溶液。

6. 根据权利要求1所述的6-氰基-（3R,5R）-二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法，其特征在于：所述的还原反应在pH为7.0的水相缓冲液中进行。

7. 根据权利要求1或2所述的6-氰基-（3R,5R）-二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法，其特征在于：所述的制备方法的实施过程如下：在反应容器中依次加入葡萄糖、所述的水相缓冲液，搅拌均匀，继续加入底物6-氰基-（5R）-羟基-3-氧代己酸叔丁酯，搅拌均匀，用氢氧化钠溶液调节pH6~8，再继续加入葡萄糖脱氢酶和酮还原酶，用氢氧化钠溶液调节pH6~8，再加入所述的辅因子，用氢氧化钠溶液维持pH6~8，搅拌反应，利用LC-MS检测反应进程，待转化率达90~99%时，结束反应。