[发明专利]5-甲基蜂蜜曲菌素的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药有效成分的提取与分离方法，尤其涉及一种从乌灵菌粉中提取分离的有效成分化合物的制备方法。

背景技术

中药有效成分的提取、分离是实现中药现代化的关键步骤，如何在尊重中医药传统的基础上，完成中药有效成分的提取分离，是一个一直困绕广大中医药工作者的问题。乌灵菌粉是浙江佐力药业股份有限公司利用现代生物发酵技术，从天然乌灵参中分离菌种，经过发酵而得的国家一类新药，化学成分主要含有腺苷为主的核苷类物质、氨基酸、异黄酮、微量元素、维生素等营养物质。乌灵胶囊是纯乌灵菌粉制剂，有补肾健脑、养心安神功效，临床上用于神经衰弱的心肾不交证，症见心烦焦虑，失眠多梦，入睡困难，多梦惊恐，心悸，健忘，头晕耳鸣等。

近年来随着对乌灵菌粉的化学成分与药理药效的深入探讨，证明其中所含5-methylmellein（5-甲基蜂蜜曲菌素）是其抗癌活性的物质基础。从文献检索的结果来看，目前尚无该方面的研究报道。中药乌灵菌粉是名贵中药材，如何更好地提高5-methylmellein的提取率，减少有效成分的损失，对于降低科学研究成本、开发具有药用成本低、疗效高、更具有实用意义的抗癌新药具有重要的意义。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种5-甲基蜂蜜曲菌素的制备方法，该方法获得的产品中有效成分含量高、质量稳定、色泽好。若以其为原料制成中药制剂，将完全满足现代化中药的要求。

为了实现上述的目的，本发明采用了以下的技术方案：

5-甲基蜂蜜曲菌素的制备方法，该方法包括以下的步骤：

1）提取浓缩

取乌灵菌粉，置回流瓶中，加6-10倍量有机溶剂，加热回流提取0.5~2小时，提1~3次，过滤，合并滤液，滤液减压浓缩至约原体积的0.1~0.2倍；

2）萃取浓缩

浓缩液置萃取漏斗中与石油醚按1:1~5的体积比混合，振摇提取3~6次，合并石油醚层，减压浓缩至膏稠状，再加乙醇溶解；

3）上柱

以柱层析硅胶为固定相，乙醇为流动相，洗脱，流速为0.5-1.5倍床体积/小时，收集绿色荧光部分的洗脱液；

4）重结晶

洗脱液减压浓缩，并蒸干，加少量石油醚加热溶解，放冷，置冰箱中析出结晶，再重结晶，得到白色结晶5-甲基蜂蜜曲菌素。

作为进一步改进，所述的步骤1）有机溶剂选用甲醇、 乙醇、正丁醇或乙酸乙酯。

作为进一步改进，所述的步骤3）原料重量与柱层析硅胶体积比为1：1~5。

作为进一步改进，所述的步骤3）柱层析硅胶直径和柱高比为1：1~20。

作为进一步改进，所述的步骤3）柱层析硅胶的颗粒为200~300目。

本发明对乌灵菌粉中有效成分进行分离纯化，乌灵菌粉中提取的有效成分5-甲基蜂蜜曲菌素具有广谱的抗癌活性，5-Methylmellein对KB（人口腔上皮癌）、MG-63（人骨肉瘤细胞）、a549（肺腺癌）、Raji （淋巴瘤细胞）、HeLa（ 人宫颈癌）5种肿瘤细胞的IC₅₀分别为25μg/mL、35.7μg/mL、35.7μg/mL、18.5μg/mL、20.8μg/mL。可用于多种癌症的治疗。若以其为原料制成中药制剂，将完全满足现代化中药的要求。为研究治疗人口腔上皮癌、人骨肉瘤细胞、肺腺癌、淋巴瘤细胞、 人宫颈癌5种肿瘤的新制剂奠定基础。

本发明的制备方法实现了仅“吸附-脱附”一步法，工艺简单，得到高纯度的化合物白色晶体5-甲基蜂蜜曲菌素。产品中有效成分含量高、质量稳定、色泽好。生产成本低、纯度高、损失小，产品质量高。

附图说明

图1为本发明制备的5-甲基蜂蜜曲菌素的红外色谱图。

图2为本发明5-甲基蜂蜜曲菌素的核磁氢谱图。

具体实施方式

实施例1

取乌灵菌粉100g，置回流瓶中，加6倍量有机溶剂（甲醇、 乙醇、正丁醇、乙酸乙酯），加热回流提取1小时，提2次，过滤，合并滤液，滤液减压浓缩至约原体积的九分之一。浓缩液置萃取漏斗中与石油醚1:1-5混合，振摇提取5次，合并石油醚层，减压浓缩至膏稠状，再加约600ml乙醇溶解。以柱层析硅胶（200~300目）为固定相，乙醇为流动相，流速为0.5倍床体积/小时，洗脱，收集绿色荧光部分的洗脱液。洗脱液减压浓缩，并蒸干，加少量石油醚加热溶解，放冷，置冰箱中析出结晶，再重结晶。得到白色结晶5-甲基蜂蜜曲菌素310mg,产率为0.031%，纯度为95.4%。