[发明专利]一种载蛋白的磁性微球的制备方法

权利要求书

1.一种载蛋白的磁性微球的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）制备Fe₃O₄颗粒：将可溶性的三价铁离子盐及乙酸钠加入到乙二醇溶液中并搅拌均匀；然后将该混合溶液放入密闭容器中，在180~300℃条件下反应4~72h；冷却后通过磁性分离，将所得产物洗涤后干燥，制得Fe₃O₄颗粒；

（2）Fe₃O₄SiO₂核壳结构的制备：将步骤（1）制得的Fe₃O₄颗粒于盐酸溶液中溶解，然后磁性分离，将分离得到的颗粒洗涤；将洗涤后的颗粒分散于乙醇、蒸馏水、浓氨水的混合溶液中；向混合溶液中逐滴加入原硅酸四乙酯，室温搅拌6~24h后对产物进行磁性分离，并将其洗涤后干燥，得到Fe₃O₄SiO₂核壳结构，即Fe₃O₄SiO₂ 磁性微球；

（3）Fe₃O₄SiO₂ 磁性微球的环氧化：将步骤（2）制得的Fe₃O₄SiO₂磁性微球于盐酸溶液中溶解，然后磁性分离，将分离得到的颗粒洗涤至中性并烘干；将烘干后的颗粒加入到经金属钠干燥脱水的甲苯溶液中，搅拌分散，然后在氮气氛围下加入环氧化试剂和经KOH干燥脱水的三乙胺，加热回流4~6h；冷却至室温，通过磁性分离，将所得产物用甲苯和丙酮洗涤后干燥，得到环氧化的Fe₃O₄SiO₂磁性微球；

（4）载蛋白的磁性微球的制备：将步骤（3）制得的环氧化的Fe₃O₄SiO₂磁性微球用PBS溶液清洗，加入pH为7~9的蛋白溶液，于37℃摇床恒温偶联2~48h后再用PBS溶液清洗；然后加入封闭试剂对未反应的氨基于37℃中和2~12h后用PBS溶液清洗，得到载蛋白的磁性微球。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤（3）中，所述环氧化试剂为γ-缩水甘油醚基三甲氧基硅烷。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤（4）中，所述封闭试剂为甘氨酸、脱脂奶粉、牛血清白蛋白、乙醇胺、氯化铵。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤（4）中，所述蛋白为重组纯化蛋白A、重组纯化蛋白G、抗原、抗体、多肽、酶。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤（1）中，所述乙酸钠的用量为可溶性的三价铁离子盐的2~20倍摩尔量；三价铁离子盐与乙二醇的用量关系为每1mmol的三价铁离子盐加入3~20mL乙二醇。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤（2）中，所述乙醇、蒸馏水、氨水的混合溶液比例为：乙醇/蒸馏水/氨水=40/10/1~60/10/1；所述氨水的浓度为25%。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤（2）中，所述原硅酸四乙酯在乙醇、水、氨水混合溶液中的浓度为1~40mmol/L。

8. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤（2）中，所述Fe₃O₄颗粒与原硅酸四乙酯的摩尔比为3:1~1:15。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤（3）中，所述Fe₃O₄SiO₂磁性微球与环氧化试剂和经KOH干燥脱水的三乙胺的用量关系为：每1g的Fe₃O₄SiO₂磁性微球加入环氧化试剂0.5~10mL，加入KOH干燥脱水的三乙胺1~15mL。

10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤（4）中，所述环氧化的Fe₃O₄SiO₂磁性微球与蛋白溶液的用量关系为：每1g的Fe₃O₄SiO₂磁性微球加入0.5~50mg蛋白溶液。