[发明专利]快速鉴定小菜蛾鱼尼丁受体基因突变的方法及其专用引物

权利要求书

1.特异引物组合物，由序列表的序列1所示单链DNA分子、序列表的序列2所示单链DNA分子和序列表的序列3所示单链DNA分子组成。

2.权利要求1所述特异引物组合物在制备试剂盒中的应用；所示试剂盒的用途为如下（a）或（b）：

（a）鉴定小菜蛾是否发生了鱼尼丁受体基因的G4899E突变；所述鱼尼丁受体基因的G4899E突变指的是鱼尼丁受体基因的开放阅读框自5’末端第14696位核苷酸由G突变为A；

（b）辅助鉴定小菜蛾对双酰胺类杀虫剂的抗性。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于：所述双酰胺类杀虫剂为氯虫苯甲酰胺和/或氟虫双酰胺。

4.包括权利要求1所述特异引物组合物的试剂盒；所示试剂盒的用途为如下（a）或（b）：

（a）鉴定小菜蛾是否发生了鱼尼丁受体基因的G4899E突变；所述鱼尼丁受体基因的G4899E突变指的是鱼尼丁受体基因的开放阅读框自5’末端第14696位核苷酸由G突变为A；

（b）辅助鉴定小菜蛾对双酰胺类杀虫剂的抗性。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述双酰胺类杀虫剂为氯虫苯甲酰胺和/或氟虫双酰胺。

6.权利要求1所述特异引物组合物的应用，为如下（a）或（b）：

（a）鉴定小菜蛾是否发生了鱼尼丁受体基因的G4899E突变；所述鱼尼丁受体基因的G4899E突变指的是鱼尼丁受体基因的开放阅读框自5’末端第14696位核苷酸由G突变为A；

（b）辅助鉴定小菜蛾对双酰胺类杀虫剂的抗性。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于：所述双酰胺类杀虫剂为氯虫苯甲酰胺和/或氟虫双酰胺。

8.一种鉴定小菜蛾针对G4899E突变的基因型的方法，包括以下步骤：以待测小菜蛾的基因组DNA为模板，分别采用敏感引物对和抗性引物对进行PCR扩增；如果采用所述敏感引物对时扩增得到了70±5bp的扩增产物同时采用所述抗性引物对时没有扩增得到70±5bp的扩增产物，待测小菜蛾为GG基因型；如果采用所述抗性引物对时扩增得到了70±5bp的扩增产物同时采用所述敏感引物对时没有扩增得到70±5bp的扩增产物，待测小菜蛾为AA基因型；如果采用所述敏感引物对时扩增得到了70±5bp的扩增产物且采用所述抗性引物对时扩增得到70±5bp的扩增产物，待测小菜蛾为GA基因型；

所述敏感引物对由序列表的序列1所示单链DNA分子和序列表的序列3所示单链DNA分子组成；所述抗性引物对由序列表的序列2所示单链DNA分子和序列表的序列3所示单链DNA分子组成；

所述G4899E突变指的是鱼尼丁受体基因的开放阅读框自5’末端第14696位核苷酸由G突变为A。

9.一种辅助鉴定小菜蛾对双酰胺类杀虫剂的抗性的方法，包括以下步骤：以待测小菜蛾的基因组DNA为模板，分别采用敏感引物对和抗性引物对进行PCR扩增；如果采用所述敏感引物对时扩增得到了70±5bp的扩增产物同时采用所述抗性引物对时没有扩增得到70±5bp的扩增产物，待测小菜蛾疑似对双酰胺类杀虫剂敏感；如果采用所述抗性引物对时扩增得到了70±5bp的扩增产物同时采用所述敏感引物对时没有扩增得到70±5bp的扩增产物，待测小菜蛾疑似对双酰胺类杀虫剂具有抗性；如果采用所述敏感引物对时扩增得到了70±5bp的扩增产物且采用所述抗性引物对时扩增得到70±5bp的扩增产物，待测小菜蛾疑似对双酰胺类杀虫敏感；

所述敏感引物对由序列表的序列1所示单链DNA分子和序列表的序列3所示单链DNA分子组成；所述抗性引物对由序列表的序列2所示单链DNA分子和序列表的序列3所示单链DNA分子组成。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于：所述双酰胺类杀虫剂为氯虫苯甲酰胺和/或氟虫双酰胺。