[发明专利]一种利用胡萝卜愈伤组织繁殖和培养保存针线虫的方法

权利要求书

1.一种利用胡萝卜愈伤组织繁殖和培养保存针线虫的方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）制备胡萝卜愈伤组织：无菌条件下将干净的胡萝卜用酒精浸泡后灼烧，再将胡萝卜去表皮后切成薄片放入灭菌培养皿中，封口，放入培养箱培养至长出胡萝卜愈伤组织；

（2）针线虫的消毒和接种：将针线虫用硫酸链霉素溶液消毒后，离心收集针线虫，用无菌水洗涤针线虫，再离心收集针线虫，最后用无菌水制备针线虫悬浮液，将针线虫悬浮液滴在胡萝卜愈伤组织上；

（3）针线虫的繁殖和培养保存：将接种了针线虫的胡萝卜愈伤组织放入培养箱培养。

2.根据权利要求1所述的利用胡萝卜愈伤组织繁殖和培养保存针线虫的方法，其特征在于还包括针线虫继代培养的步骤，是用无菌水或0.2～0.3wt%硫酸链霉素溶液清洗培养线虫的培养皿中的线虫，或用贝曼漏斗法分离胡萝卜愈伤组织上的针线虫，再重复步骤（2）和（3）的操作。

3.根据权利要求1所述的利用胡萝卜愈伤组织繁殖和培养保存针线虫的方法，其特征在于：

步骤（1）中所述的胡萝卜为新鲜胡萝卜，所述的新鲜胡萝卜为健康、无伤、采收2周以内的胡萝卜；

步骤（1）中所述的酒精为体积浓度90%以上酒精；

步骤（1）中所述的培养的条件为25～27℃黑暗培养。

4.根据权利要求1所述的利用胡萝卜愈伤组织繁殖和培养保存针线虫的方法，其特征在于步骤（1）所述的制备胡萝卜愈伤组织的方法为：

将新鲜胡萝卜洗净晾干，在超净工作台中用体积浓度95%工业酒精中浸泡2min后灼烧，并重复2～3次，用无菌刀削去表皮，将胡萝卜切成5mm薄片，放入灭菌培养皿中，封口，放入培养箱中于25℃黑暗培养至长出胡萝卜愈伤组织。

5.根据权利要求1所述的利用胡萝卜愈伤组织繁殖和培养保存针线虫的方法，其特征在于：

步骤（2）中所述的针线虫的消毒为使用0.2～0.3wt%硫酸链霉素溶液表面消毒6～12h；

步骤（2）中所述的离心的条件为4500～5000rpm离心2～5min。

6.根据权利要求5所述的利用胡萝卜愈伤组织繁殖和培养保存针线虫的方法，其特征在于：所述的离心的条件为4700rpm离心3min。

7.根据权利要求1所述的利用胡萝卜愈伤组织繁殖和培养保存针线虫的方法，其特征在于：

步骤（3）中所述的繁殖的条件为将接种了针线虫的胡萝卜愈伤组织放入培养箱23～27℃黑暗培养8～10周。

8.根据权利要求7所述的利用胡萝卜愈伤组织繁殖和培养保存针线虫的方法，其特征在于：

所述的繁殖的条件为将接种了针线虫的胡萝卜愈伤组织放入培养箱25℃黑暗培养8～10周。

9.根据权利要求1所述的利用胡萝卜愈伤组织繁殖和培养保存针线虫的方法，其特征在于：

步骤（3）中所述的培养保存的条件为将接种了针线虫的胡萝卜愈伤组织放入培养箱22～25℃黑暗培养保存16周以上。

10.根据权利要求9所述的利用胡萝卜愈伤组织繁殖和培养保存针线虫的方法，其特征在于：

所述的培养保存的条件为将接种了针线虫的胡萝卜愈伤组织放入培养箱23℃黑暗培养保存16周以上。