[发明专利]制备高纯度赛门苷Ⅰ的方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种生物医药技术领域的方法，具体是一种制备高纯度赛门苷Ⅰ的方法。

背景技术

罗汉果SiraitiaeFructus为我国特产药材，具有清热润肺、利咽开音、润肠通便之功效，常用于肺热燥咳、咽痛失音、肠燥便秘的治疗。罗汉果主要含有罗汉果甜苷等化学成分，罗汉果甜苷为一系列葫芦烷型三萜皂苷，常作为天然甜味剂在药品、食品、饮料中广泛应用。现代研究发现，罗汉果甜苷中赛门苷Ⅰ，即siamenoside I：

的甜度最大，为蔗糖的560倍，甜度纯正，起甜快，甜味绵长，无甜叶菊苷、甘草甜素等天然甜味剂之后苦涩味，极易溶于水，稳定性良好；同时，赛门苷Ⅰ几乎不产生热量，具有不升高血糖、不升高血脂等优点；具有降血糖、降血脂等活性，因此，赛门苷Ⅰ非常适合作为糖尿病人、肥胖人群的保健食品，是优良的天然甜味剂。另外，赛门苷Ⅰ也是罗汉果的活性成分和特征性成分，高纯度的赛门苷Ⅰ可以用于罗汉果的鉴别及质量评价。因此，制备高纯度的赛门苷Ⅰ具有重要意义。

然而，目前已在罗汉果中发现罗汉果苷ⅡE（mogroside ⅡE）、7-氧-罗汉果苷ⅡE(7-oxomogroside ⅡE)、罗汉果苷ⅢE（mogrosideⅢE）、罗汉果苷Ⅳ（mogrosideⅣ）、罗汉果苷Ⅴ（mogrosideⅤ）、罗汉果苷Ⅵ（mogrosideⅥ）、赛门苷Ⅰ（siamenoside Ⅰ）、11-氧-罗汉果苷Ⅴ（11-oxo-mogroside Ⅴ）、7-氧-罗汉果苷Ⅴ（7-oxomogroside Ⅴ）等20多种皂苷，这些皂苷结构类似，分离难度大。

经对现有技术文献进行检索，公开号102180930A公开日2011-09-14，记载了一种“纯化赛门苷Ⅰ的方法”：该技术将罗汉果粉碎，加入5-15倍量40-60%甲醇提取2-3次，提取液减压回收甲醇，母液加适量水分散滤过，加入大孔树脂柱吸附，4-6BV40-60%甲醇溶液洗脱，收集洗脱液减压浓缩，浓缩液加甲醇至醇浓度50-70%，加活性炭共沸，脱色液滤过，加氯仿搅拌均匀静置分层，收集氯仿层，回收氯仿，得粗品，选用乙酸乙酯-正丁醇-磷酸水(pH2-3)溶液系统，采用高速逆流色谱分离，减压干燥即得赛门苷I纯品。采用该方法操作繁琐，需使用氯仿、甲醇等有毒溶剂，且所采用的纯化设备高速逆流色谱仪价格昂贵。

李倩在《高纯罗汉果苷V的提取纯化技术研究》（《湖南农业大学》2011年）中公开了一种建立HPLC定量检测罗汉果苷Ⅴ的方法，其HPLC色谱条件为：色谱柱为Hypersil ODS(250mm×4.6mm，5μm)，柱温35℃，检测波长为203mn，流动相为乙腈：水(23：77，v/v)，进样量20μL，流速0.8mL/min。但该技术使用硅胶柱，样品损失大，在制备罗汉果苷V的过程中，赛门苷Ⅰ极易损失。同时，该技术使用氯仿、甲醇等有毒溶剂。

发明内容

本发明针对现有技术存在的上述不足，提出一种制备高纯度赛门苷Ⅰ的方法，通过水提法，采用三种不同分离机制的柱层析进行分离，整个过程只使用乙醇、水，不使用有毒溶剂；具有纯度高、得率高、工艺简单、成本低等优点。

本发明是通过以下技术方案实现的：本发明通过将罗汉果水煮后的上清液通过大孔树脂吸附后经减压洗脱得到浸膏，将浸膏溶解并取上清液上ODS柱并洗去杂质后得到赛门苷Ⅰ粗品，再将粗品进行Sephadex LH-20柱层析，经乙醇梯度洗脱后进行HPLC检测并合并含赛门苷Ⅰ的流份，最后回收溶剂即得赛门苷Ⅰ精制品，具体步骤包括：

1）将罗汉果粉碎成粗粉加水煎煮后离心处理并收集上清液；

2）将步骤1）得到的上清液通过大孔树脂吸附后，用40%（v/v）酒精洗去杂质，然后用60-80%（v/v）酒精洗脱，最后从洗脱液中回收乙醇并得到浸膏；

3）将浸膏用60%（v/v）酒精溶解、离心并取上清液上ODS柱，先用60%（v/v）酒精洗去杂质，然后采用70-90%（v/v）酒精洗脱；最后从洗脱液中回收乙醇并进行HPLC检测，合并含赛门苷Ⅰ的流份得到赛门苷Ⅰ粗品；

4）将赛门苷Ⅰ粗品进行Sephadex LH-20柱层析，经乙醇梯度洗脱后进行HPLC检测并合并含赛门苷Ⅰ的流份，最后回收溶剂即得赛门苷Ⅰ精制品。

所述的乙醇梯度洗脱是指：依次用70%、80%、90%（v/v）酒精（各300mL）梯度洗脱（流速3mL/min），每份30mL进行洗脱。

步骤2）和步骤3）中，洗脱液的用量均为大孔树脂的柱体积、ODS柱体积的1.5-2.5倍。