[发明专利]农作物转基因成份检测法及所用芯片

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学检测技术，尤其是涉及大豆、玉米等相关产品的转基因成份检测。 

背景技术

转基因，是指运用科学手段从某种生物中提取所需的基因，将其转入另一种生物中，使之与另一种生物的基因进行重组，从而产生特定的具有优良遗传性状的物质。利用转基因技术，可以改变动植物性状、培育新品种；也可以利用其他生物体培育出人类所需要的生物制品，用于医药、食品等方面。转基因是基因工程的重要组成部分。 

全球转基因作物发展势头强劲。据专家提供的权威资料，2010  年全球转基因作物种植面积达到 1.48 亿公顷，是 1996 年的 87 倍，15 年间年均增长近 5 倍。1996 年全球种植转基因作物的国家仅 6 个，2010 年已达 29 个。4 大主要转基因作物种植面积也创新高。全球大豆面积的五分之四（81%）、棉花面积的三分之二（64%）、玉米面积的三分之一（29%）、油菜面积的四分之一（23%）种植的都是转基因品种。  

全球有近 40 个国家和地区虽未正式批准转基因作物商业化种植，但允许进行试验研究或进口转基因作物原料用于饲料和食品加工。2010 年有 8 个欧盟成员国批准种植抗虫玉米等转基因作物；欧盟生物安全委员会宣布各国可自主决定是否种植转基因作物；瑞典首次批准种植转基因优质淀粉马铃薯。2008  年全球转基因作物产品总收益超过 1300 亿美元。 截至目前，中国共批准发放 7 种转基因植物的农业转基因生物安全证书，即1997 年发放的耐贮存番茄、抗虫棉花安全证书，1999 年发放的改变花色矮牵牛和抗病辣椒（甜椒、线辣椒）安全证书，2006  年发放的转基因抗病番木瓜安全证书，2009  年发放的转基因抗虫水稻和转基因植酸酶玉米安全证书。根据中国农业生物技术学会数据显示，2010 年中国种植转基因作物种植面积达到 350 万公顷，排名世界第六。其中转基因棉花约 330 万公顷，其余是转基因木瓜、转基因番茄、转基因辣椒等，所有作物都获得农业部颁发的转基因生物安全证书的农作物品种，是政策允许范围内种植的。 

然而在安全性方面，有一些学者认为目前人类对基因的活动方式了解的还不够透彻，对控制基因调整后的结果没有十足的把握。当一种功能基因移入另一机体中，这种基因的功能可能发生不可预测的变化，而机体的相应反应更不可预测。 对于转基因作物的担心主要有两方面：（1）转基因生物对生物多样性的影响；（2）转基因生物对人体健康的威胁。 

由于基因工程是一个新的领域，人们还难以完全准确地预测到转基因植物潜在危险性。虽然迄今已商品化的转基因食品尚无对人体有毒副作用的报道，但并非转基因植物完全没有不可预见的负效应。2001 年 5月，我国《农业转基因生物安全条例》开始实施, 要求对大豆、玉米、油菜类转基因食品必须加以标识。我国农业部 2003 年初在全国范围内进行转基因产品安全管理的执法大检查。按照国家农业部第 10 号令《农业转基因生物标识管理办法》规定，自 2003 年 3 月 20 日起，国家对农业转基因生物实行标识制度，要求对五大类 17 种农业转基因生物进行标识。但真的要使这些法规、制度得以实施，关键还在于有一个有效的检测技术。为此，科研人员分别从检测外源蛋白和检测外源 DNA 着手，建立了一系列检测方法。 

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种灵敏度高、操作简便、假阳性率低的农作物转基因成份检测法。 

为了解决上述技术问题，本发明提供一种农作物转基因成份检测法，包括以下步骤： 

一、制备转基因成份检测芯片； 

针对转基因农作物的内源、外源、品系这三类基因，选择特异性探针，每条特异性探针5'进行氨基修饰；然后将氨基修饰后的探针固定醛基玻片上，预杂交后，得转基因成份检测芯片； 

二、检测： 

依次进行以下步骤： 

1）、利用已知标准，获取转基因片段的引物； 

2）、农作物待测样品中DNA的提取，得提取液； 

3）、靶基因的多重PCR扩增： 

以步骤2）的提取液作为PCR模板，利用步骤1）所得的引物进行多重PCR扩增；得扩增产物； 

4）、芯片杂交检测： 

将扩增产物与转基因成份检测芯片杂交；然后进行荧光探针杂交，再利用T4DNA连接酶进行酶连接（即，利用T4DNA连接酶补齐），接着用NaOH变性，最后用洗液洗涤；