[发明专利]农作物转基因成份检测法及所用芯片

权利要求书

1.农作物转基因成份检测法，其特征是包括以下步骤：

一、制备转基因成份检测芯片；

针对转基因农作物的内源、外源、品系这三类基因，选择特异性探针，每条特异性探针的5'进行氨基修饰；然后将氨基修饰后的探针固定醛基玻片上，预杂交后，得转基因成份检测芯片；

二、检测：

依次进行以下步骤：

   1）、利用已知标准，获取转基因片段的引物；

   2）、农作物待测样品中DNA的提取，得提取液；

3）、靶基因的多重PCR扩增：

以步骤2）的提取液作为PCR模板，利用步骤1）所得的引物进行多重PCR扩增；得扩增产物；

4）、芯片杂交检测：

将扩增产物与转基因成份检测芯片杂交；然后进行荧光探针杂交，再利用T4DNA连接酶进行酶连接，接着用NaOH变性，最后用洗液洗涤； 

所述荧光探针为与特异性探针相对应的荧光探针；

5）、杂交结果的检测与分析：

用扫描仪扫描上述步骤4）所得的芯片，利用常规软件对结果进行分析。

2.根据权利要求1所述的农作物转基因成份检测法，其特征是：

所述步骤4）中：

进行荧光探针杂交的具体内容如下：

将浓度为2~3 uM的每种荧光探针等体积混合后，得荧光探针混合液；将荧光探针混合液与杂交液按1：1体积比混合后，与前述步骤所得的已经与扩增产物杂交的转基因成份检测芯片进行杂交；47~49℃孵育 29~31 分钟，室温静置8~12分钟；

酶连接反应体系为： 0.05U/ul T4 连接酶反应液 1ul， T4 10×Buffer 2 ul；水补足到 20ul；

NaOH变性为：利用浓度为0.3M的NaOH溶液洗涤4~6分钟。

3.根据权利要求2所述的农作物转基因成份检测法，其特征是：

步骤4）中的洗液为洗液(2×SSC，0.5％SDS)。

4.根据权利要求2或3所述的农作物转基因成份检测法，其特征是： 

所述荧光探针如下表所示：

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