[发明专利]一种卷烟滤嘴中苯并[a]芘含量的测定方法

说明书

技术领域

本发明属于卷烟滤嘴样本的理化检验技术领域，主要涉及卷烟滤嘴样本的多环芳烃类化合物测定技术领域，具体涉及一种采用液相色谱-光电电离-串联质谱仪(LC-APPI-MS/MS)测定卷烟滤嘴中苯并[a]芘含量的方法。

背景技术

自1933年J.Cook首次从煤焦油中分离到苯并芘并诱发小鼠皮肤癌以来，苯并[a]芘作为确定的人类致癌物受到科研工作者的广泛关注。肿瘤流行病学调查及动物实验研究发现苯并[a]芘具有较强致癌性，它与肿瘤的发生密切相关，尤其与人类肺癌的发生高度相关。苯并[a]芘也存在于卷烟烟气和抽吸过的卷烟滤嘴中，检测抽吸过的卷烟滤嘴中的含量水平可以间接评估吸烟者感受苯并芘的量，对于吸烟危害性评价具有较为重要的意义。

到目前为止，已有研究者建立了高效液相色谱-荧光检测法（HPLC-FL）检测卷烟滤嘴中的苯并[a]芘的方法，但方法前处理比较复杂，包括液液萃取、固相萃取，且一个样需要20个滤嘴。气相色谱质谱法（GC/MS）也被应用于测定苯并[a]芘化合物。研究报道采用GC/MS测定了主流烟气中痕量苯并[a]芘的方法，此方法的分离效果及色谱重现性好。但是，GC/MS法的前处理选用了固相萃取和浓缩过程，使得其较为复杂费时。近年来，液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）被广泛应用于新药的发现与开发。液相色谱配备三级四级杆串联质谱被广泛应用于复杂生物基质中低含量化合物的定量检测，并且此方法一般具有较高选择性和较短的分析时间。由于LCMS/MS配制的离子源一般为电喷雾电离和大气压化学电离离子源，这些离子源对于大分子有机化合物具有较好的电离效果，而对于多环芳烃类化合物的电离效果较差，因此限制了其在此领域的应用。大气压光电离离子源（APPI）是一个新的电离方法，使用紫外线对样品进行电离，适合于低极性化合物的高灵敏度电离方法，尤其是在引入掺杂剂后可以较好的提高苯并[a]芘的检测灵敏度。

发明内容

本发明的目的在于提供一种采用液相色谱-大气压光电离-串联质谱仪(LC-APPI-MS/MS)方法测定卷烟滤嘴中苯并[a]芘含量的方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：卷烟滤嘴中苯并[a]芘含量的测定方法，包括以下工艺步骤：

（1）样品的采集：收集抽吸卷烟后的滤嘴，去除烟丝残存部分，置于棕色储液瓶中低温冷冻保存；

（2）样品的前处理：取一个滤嘴，剥去包装纸和胶以后，放入25mL三角瓶中，加入200μL的1μg/mL的苯并[a]芘-d12，再加入9.8mL乙腈，振荡萃取10min。萃取液经0.22μm聚醚砜有机相滤膜过滤，收集滤液待LC-MS/MS分离分析；

（3）标准工作溶液的配制：分别称取10.0mg苯并[a]芘和苯并[a]芘-d12于两个10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，摇匀，得到1.0mg/mL的苯并[a]芘和苯并[a]芘-d12的一级储备液；分别移取100μL的苯并[a]芘和苯并[a]芘-d12的一级储备液于100mL的容量瓶，乙腈定容至刻度，得到1.0μg/mL的苯并[a]芘和苯并[a]芘-d12的二级储备液，放入-20°C冰箱备用。用二级储备液配制0.5，1，2，5，10，20和40ng/mL标准工作溶液。

（4）LC-MS/MS测定：吸取配制好的不同浓度的苯并[a]芘的标准工作溶液，注入LC-MS/MS系统，测得其标准品峰面积和内标峰面积的比值与目标物浓度关系的一元线性回归方程Y=0.199X+0.0079，相关系数≥0.999，其中Y代表分析物与内标物峰面积的比值，X表示样品待测液中目标分析物的浓度，接着对振荡萃取和过滤之后的样品待测液进行测定，根据分析物峰面积和内标物峰面积的比值，代入一元线性回归方程，求得样品待测液中的苯并[a]芘含量。

其中，LC-MS/MS测定条件如下所述：色谱条件：Dionex Acclaim120C₁₈色谱柱（150mm×3mm i.d.×3μmd.f.）；流动相A为乙腈溶液，流动相B为超纯水；柱温40°C；进样量5μL。掺杂剂：甲苯，流速为100μL/min；洗脱条件：95%A和5%B等度洗脱，流速为550μL/min；分析时间为8min。