[发明专利]一种卡贝缩宫素的纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及多肽的纯化技术领域，尤其涉及卡贝缩宫素的纯化技术。

 

背景技术

卡贝缩宫素（Carbetocin）是一种合成的具有激动剂性质的长效催产素九肽类似物，对非妊娠的子宫没有作用，但是对妊娠的子宫和刚生产的子宫具有有效的子宫收缩作用，其临床和药理特性与天然产生的催产素类似。像催产素一样，卡贝缩宫素与子宫平滑肌的催产素受体结合，引起子宫的节律性收缩，在原有的收缩基础上，增加其频率和增加子宫张力。在非妊娠状态下，子宫的催产素受体含量很低，在妊娠期间增加，分娩时达高峰。硬膜外或腰麻下剖腹产术后可以立即单剂量静脉给药，以预防子宫张力不足和产后出血。

不论是静脉注射还是肌肉注射卡贝缩宫素后，子宫迅速收缩，可在两分钟内达到一个明确强度。单剂量静脉注射卡贝缩宫素对子宫的活性作用可持续大约一个小时，因此足以预防刚生产后的产后出血。产后给予卡贝缩宫素后，在收缩的频率与幅度方面都比催产素要长，并且对有出血倾向、需额外使用缩宫素者，卡贝缩宫素耐受性好，与缩宫素一样有效甚至更有效。目前临床常用的促进子宫缩收药物麦角新碱，会导致恶心、呕吐、高血压和冠脉痉挛等。卡贝缩宫素是一种长效的类催产素药物。与麦角新碱相比，使用卡贝缩宫素在预防阴道分娩妇女的产后出血方面同样有效，并且恶心、呕吐、高血压的发生比例显著降低。因此，卡贝缩宫素在临床应用上，具有广阔的市场前景。

卡贝缩宫素常用纯化方法通常包括反相高效液相色谱法、凝胶法、离子交换法等，采用任何一种单一方法，都很难分离得到高纯产品(＜99%），或者收率较低（小于50%）。目前，很少有关于其分离纯化方面的研究报道，程生强，马亚平等在其研究中报道，以磷酸缓冲液作为洗脱液，采用反相高效液相色谱法纯化卡贝缩宫素，并采用离子交换法转盐，得到醋酸卡贝缩宫素，收率为70%-75%，目的肽纯度为98%。

综合分析国内外关于合成卡贝缩宫素的纯化方法，主要存在两点问题：①采用单一的纯化方法，产品纯度低；②采用多种纯化手段，产品收率低。

 

发明内容

本发明针对现有工艺的不足，提出一种卡贝缩宫素的分离纯化方法，产品纯度高，纯化收率高。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：采用反相离子对液相色谱法，将反相色谱和离子色谱的优势结合起来，减少纯化步骤，提高产品纯度，其方法包含以下步骤：

步骤一、采用反相离子对液相色谱法，以反相色谱柱为固定相，一定浓度离子对试剂水溶液为流动相A相，甲醇或乙腈或乙醇为流动相B相，进行梯度洗脱，洗脱梯度B%为：5-40%，优选25%-35%，分三段收集目的峰，分别为峰前、合格品、峰后，合格品为纯度达到99.5%部分，峰前部分保留时间小于合格品的保留时间，纯度为90.0%-99.5%，峰后部分保留时间大于合格品的保留时间，纯度为90.0%-99.5%。

步骤二、将以上①步得到峰前、峰后部分分别纯化，采用反相离子对液相色谱法，以反相色谱柱为固定相，一定浓度离子对试剂水溶液为流动相A相，甲醇或乙腈或乙醇为流动相B相，进行梯度洗脱，洗脱梯度B%为：5-40%，优选25%-35%，将得到的合格品合并，得到纯度为99.5%以上的目的肽。

步骤三、将以上得到的合格品，采用反相离子对液相色谱法，以反相色谱柱为固定相，一定浓度的补偿离子水溶液为A相，甲醇或乙腈或乙醇为流动相B相，进行梯度洗脱，洗脱梯度B%为：10-80%，优选30%-70%，将得到的合格品合并，得到纯度为99.5%以上的目的肽。      

将洗脱液添加补偿离子，包括醋酸、磷酸、盐酸、三氟乙酸等，得到不同盐形式的卡贝缩宫素。

与已有工艺相比，本发明操作简单，一步纯化达到99.5%的纯度，收率达到70%-75%，具有明显的成本优势。

 

具体实施方式

本文所述，术语“反相离子对色谱法”指以反相填料为固定相，离子对试剂为流动相的色谱行为，或者是以离子交换填料为固定相，有机溶剂为流动相的色谱行为，目的是结合离子色谱和反相色谱的优势，高效分离纯化合成卡贝缩宫素。

本文所述，术语“离子对试剂”包括R-SO₃Na或R-SO₄Na，其中R选自甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基。

下面结合具体实施例对本发明进行详细描述，本部分的描述仅是示范性和解释性，不应对本发明的保护范围有任何的限制作用。