[发明专利]鱼类头肾组织来源细胞系的建立方法无效

专利信息
申请号: 201210518784.8 申请日: 2012-12-06
公开(公告)号: CN103060259A 公开(公告)日: 2013-04-24
发明(设计)人: 沙珍霞;陈松林;郑媛;王娜;谢明树 申请(专利权)人: 沙珍霞
主分类号: C12N5/07 分类号: C12N5/07;C12R1/91
代理公司: 北京一格知识产权代理事务所(普通合伙) 11316 代理人: 滑春生
地址: 266071 *** 国省代码: 山东;37
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摘要:
搜索关键词: 鱼类 组织 来源 细胞系 建立 方法
【权利要求书】:

1.一种鱼类头肾组织来源细胞系的建立方法,包括以下步骤:

(1) 头肾组织的处理:将头肾组织剪成小块,加入胰蛋白酶进行消化,加入,细胞培养液终止消化,收集经消化处理的组织细胞悬液,离心去除上清;

(2) 原代培养:加入细胞培养液重悬后于培养箱中培养;

(3) 传代培养:原代培养细胞开始增殖至组织块周围细胞晕停止生长后,加入胰蛋白酶消化悬起细胞,利用细胞培养液进行传代培养;

其中,采用的细胞培养液为在基础细胞培养液中添加胎牛血清、丙酮酸钠、2-巯基乙醇、人碱性成纤维细胞生长因子。

2.按照权利要求1所述的鱼类头肾组织来源细胞系的建立方法,其特征在于:所述的鱼类是半滑舌鳎。

3.按照权利要求1所述的鱼类头肾组织来源细胞系的建立方法,其特征在于:所述基础细胞培养液pH为7.0-7.3。

4.按照权利要求3所述的鱼类头肾组织来源细胞系的建立方法,其特征在于:所述基础细胞培养液为MEM培养液。

5.按照权利要求1所述的鱼类头肾组织来源细胞系的建立方法,其特征在于:在所述基础细胞培养液进一步添加青霉素和/或链霉素。

6.按照权利要求1所述的鱼类头肾组织来源细胞系的建立方法,其特征在于:所述基础细胞培养液中的胎牛血清添加量为占细胞培养液总体积10-20%,优选20%。

7.按照权利要求1所述的鱼类头肾组织来源细胞系的建立方法,其特征在于:所述基础细胞培养液中的添加丙酮酸钠、2-巯基乙醇、人碱性成纤维细胞生长因子在细胞培养液中分别达到0.1-5 mM、10-100 mM、1-20 ng/ml。

8.按照权利要求1所述的鱼类头肾组织来源细胞系的建立方法,其特征在于:所述第2步骤中,所述培养中在24℃培养箱中培养,每隔7天半量更换细胞培养液一次。

9.按照权利要求1所述的鱼类头肾组织来源细胞系的建立方法,其特征在于:所述第3步聚传代培养为:原代培养获得的细胞用添加所述细胞培养液将细胞稀释至2×105细胞/ml浓度进行原瓶传代培养;当瓶底细胞长至单层后在传代中以2×104-2×105细胞/ml浓度进行分瓶接种,传代间隔期为3-7天;传至11代以后,细胞培养液中的胎牛血清含量减为5%-15%。

10.按照权利要求1至9任一项所述的鱼类头肾组织来源细胞系的建立方法获得的细胞系。

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