[发明专利]鱼类头肾组织来源细胞系的建立方法无效
申请号: | 201210518784.8 | 申请日: | 2012-12-06 |
公开(公告)号: | CN103060259A | 公开(公告)日: | 2013-04-24 |
发明(设计)人: | 沙珍霞;陈松林;郑媛;王娜;谢明树 | 申请(专利权)人: | 沙珍霞 |
主分类号: | C12N5/07 | 分类号: | C12N5/07;C12R1/91 |
代理公司: | 北京一格知识产权代理事务所(普通合伙) 11316 | 代理人: | 滑春生 |
地址: | 266071 *** | 国省代码: | 山东;37 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | |||
搜索关键词: | 鱼类 组织 来源 细胞系 建立 方法 | ||
1.一种鱼类头肾组织来源细胞系的建立方法,包括以下步骤:
(1) 头肾组织的处理:将头肾组织剪成小块,加入胰蛋白酶进行消化,加入,细胞培养液终止消化,收集经消化处理的组织细胞悬液,离心去除上清;
(2) 原代培养:加入细胞培养液重悬后于培养箱中培养;
(3) 传代培养:原代培养细胞开始增殖至组织块周围细胞晕停止生长后,加入胰蛋白酶消化悬起细胞,利用细胞培养液进行传代培养;
其中,采用的细胞培养液为在基础细胞培养液中添加胎牛血清、丙酮酸钠、2-巯基乙醇、人碱性成纤维细胞生长因子。
2.按照权利要求1所述的鱼类头肾组织来源细胞系的建立方法,其特征在于:所述的鱼类是半滑舌鳎。
3.按照权利要求1所述的鱼类头肾组织来源细胞系的建立方法,其特征在于:所述基础细胞培养液pH为7.0-7.3。
4.按照权利要求3所述的鱼类头肾组织来源细胞系的建立方法,其特征在于:所述基础细胞培养液为MEM培养液。
5.按照权利要求1所述的鱼类头肾组织来源细胞系的建立方法,其特征在于:在所述基础细胞培养液进一步添加青霉素和/或链霉素。
6.按照权利要求1所述的鱼类头肾组织来源细胞系的建立方法,其特征在于:所述基础细胞培养液中的胎牛血清添加量为占细胞培养液总体积10-20%,优选20%。
7.按照权利要求1所述的鱼类头肾组织来源细胞系的建立方法,其特征在于:所述基础细胞培养液中的添加丙酮酸钠、2-巯基乙醇、人碱性成纤维细胞生长因子在细胞培养液中分别达到0.1-5 mM、10-100 mM、1-20 ng/ml。
8.按照权利要求1所述的鱼类头肾组织来源细胞系的建立方法,其特征在于:所述第2步骤中,所述培养中在24℃培养箱中培养,每隔7天半量更换细胞培养液一次。
9.按照权利要求1所述的鱼类头肾组织来源细胞系的建立方法,其特征在于:所述第3步聚传代培养为:原代培养获得的细胞用添加所述细胞培养液将细胞稀释至2×105细胞/ml浓度进行原瓶传代培养;当瓶底细胞长至单层后在传代中以2×104-2×105细胞/ml浓度进行分瓶接种,传代间隔期为3-7天;传至11代以后,细胞培养液中的胎牛血清含量减为5%-15%。
10.按照权利要求1至9任一项所述的鱼类头肾组织来源细胞系的建立方法获得的细胞系。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于沙珍霞,未经沙珍霞许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201210518784.8/1.html,转载请声明来源钻瓜专利网。