[发明专利]一种重组蜈蚣抗昆虫毒素基因及其表达纯化方法和用途

权利要求书

1.一种重组蜈蚣抗昆虫毒素Scolotoxin-Ssm2.1基因，其特征是：SEQ ID NO1的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的一种重组蜈蚣抗昆虫毒素Scolotoxin-Ssm2.1基因，其特征是：重组蜈蚣抗昆虫毒素Scolotoxin-Ssm2.1基因突变形成至少含有64%的与SEQ ID NO1中的密码子相同的突变体基因。

3.一种重组蜈蚣抗昆虫毒素Scolotoxin-Ssm2.1基因的表达纯化方法，其特征是包括如下步骤：

A，构建含有重组蜈蚣抗昆虫毒素Scolotoxin-Ssm2.1基因或含有重组蜈蚣抗昆虫毒素Scolotoxin-Ssm2.1突变体基因的重组质粒pSUMO-M- Scolotoxin-Ssm2.1;

B，将重组质粒pSUMO-M- Scolotoxin-Ssm2.1转化至宿主细胞中，得到含有重组质粒的工程菌株；

C，上述工程菌株经IPTG诱导，获得含有重组蜈蚣抗昆虫毒素的菌体；

D，将上述菌体清洗、离心、超声破碎，收集上清液；

E，将上清液反复通过Ni²⁺-IDA亲和层析柱纯化，得到融合蛋白；

F，上述融合蛋白经过SUMO蛋白酶酶切，得到重组蜈蚣抗昆虫毒素rScolotoxin-Ssm2a。

4.根据权利要求3所述重组蜈蚣抗昆虫毒素Scolotoxin-Ssm2.1基因的表达纯化方法，其特征是所述步骤c的具体步骤为：将重组质粒的工程菌株接种到LB培养基溶液中，当工程菌培养液浓度OD₆₀₀达到0.6~0.8时，加入IPTG至终浓度0.5mol/L，于18℃表达6小时，获得含有重组蜈蚣抗昆虫毒素的菌体。

5.根据权利要求3所述的重组蜈蚣抗昆虫毒素Scolotoxin-Ssm2.1基因的表达纯化方法，其特征是：所述宿主细胞是大肠杆菌BL21(DE3)。

6.一种根据权利要求3至5中任意一项所述的重组蜈蚣抗昆虫毒素Scolotoxin-Ssm2.1基因的表达纯化方法得到的重组蜈蚣抗昆虫毒素rScolotoxin-Ssm2a。

7.重组蜈蚣抗昆虫毒素rScolotoxin-Ssm2a在制备神经毒性类制剂中的应用。

8.根据权利要求7中所述的应用，特别是重组蜈蚣抗昆虫毒素rScolotoxin-Ssm2a在制备杀虫剂中的应用。

9.根据权利要求8所述的重组蜈蚣抗昆虫毒素rScolotoxin-Ssm2a在制备神经毒性类制剂中的应用，其特征是所述重组蜈蚣抗昆虫毒素rScolotoxin-Ssm2a中含有两对正确连接的共价二硫键。