[发明专利]一种节旋藻蛋白的分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明属于生化分离纯化领域，特别涉及一种节旋藻蛋白的分离纯化方法。

背景技术

海藻蛋白存在于蓝藻，红藻，以及部分隐藻和甲藻中。对节旋藻蛋白生物活性研究表明，节旋藻蛋白具有明显的抗肿瘤、消炎等作用，同时节旋藻蛋白，能增强人体免疫功能、抗氧化、抗衰老，达到保健延寿，青春常在的功效。节旋藻蛋白不但是优质医药中间体，同时可作为医药、保健原料，广泛用于保健食品及医药领域。

其主要功能：

l.抗辐射：

节旋藻蛋白能显著地减轻和逐渐消除辐照、化疗对血白细胞和骨髓细胞的损伤，并能加速外周血白细胞和骨髓有核细胞的恢复；

2.抗癌：

节旋藻蛋白能显著抑制癌细胞生长，可用于癌症的防治。

3.调节免疫：

节旋藻蛋白能提高淋巴细胞活性，通过淋巴系统提高机体免疫功能，全面增强机体的防病、抗病能力；

4.促进造血：

节旋藻蛋白对骨髓造血功能具有刺激作用，因而对白血病和再生障碍性贫血等血液顽症有着积极的辅助治疗作用；

5.延缓衰老等

由上述作用可知，节旋藻蛋白具有极大的开发潜力。但目前由于大规模分离纯化节旋藻蛋白的技术还未成熟，传统的节旋藻蛋白制备方法主要是冻融法，硫酸铵盐析，上各种层析柱，工艺繁琐，得率低，成本高，价格昂贵，并且不适合工业化生产。

发明内容

本发明的目的在于提供一种节旋藻蛋白的分离纯化方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种节旋藻蛋白的分离纯化方法，

步骤1）将藻粉在PBS中充分浸泡，混匀后常温下避光放置24-72小时离心，收集上清液；

步骤2）将上清液经滤膜进行超滤浓缩，浓缩液中加入甲壳胺使混合液pH达到6.5-7.2，并进行搅拌；

步骤3）上述搅拌均匀的混合液离心取上清液，上清液中加入水经滤膜进行超滤浓缩，超滤置换钠离子得到纯化浓缩液；浓缩液喷雾干燥，即得药品级节旋藻蛋白。

所述步骤1）按体积比1：15-30将藻粉在PBS中充分浸泡，混匀后常温下避光放置24—72小时，再以18000-22000g离心20-30分钟，收集上清液。

所述步骤2）将上清液经50KD的滤膜进行超滤浓缩，浓缩液中加入甲壳胺使混合液中甲壳胺终浓度为0.25—0.35％，并用碱调节混合液中pH达到6.5-7.2，同时进行搅拌15-30min是混合液充分混匀。

所述加入碱浓度在40-80g/L；碱为氢氧化钠或氢氧化钾。

所述步骤3）上述搅拌均匀的混合液离心取上清液，上清液中加入其体积2—3倍水经50KD的滤膜超滤浓缩，所得浓缩液再次加入其体积2-3倍水再次进行超滤浓缩，超滤浓缩共进行4-9次，进而充分超滤置换钠离子得到纯化浓缩液；浓缩液喷雾干燥，即得药品级节旋藻蛋白。

所述浓缩液喷雾干燥具体为喷雾干燥的进风温度为150—200℃，出风温度为70-90℃。

所述药品级节旋藻蛋白，其中藻蓝蛋白的纯度大于3.0，含量大于61.5％，别藻蓝蛋白的含量小于3％，其它蛋白的含量小于2％。

本发明所具有的优点：目前国内尚无大量制备药品级节旋藻蛋白的生产工艺，本发明提供的药品级节旋藻蛋白制备方法，提取出的蛋白纯度高，提取率高达藻粉干重的4％，是目前常用提取节旋藻蛋白得率的3倍，工艺简单有效，生产成本低，产量大，简单有效，且适合大规模制备药品级节旋藻蛋白等特点。由本方法制备的节旋藻蛋白，节旋藻蛋白的藻蓝蛋白纯度大于3.0，含量大于61.5％，别藻蓝蛋白的含量小于3％，其它蛋白含量小于2％，水溶性好，容易被人体消化和吸收。因此，本发明提供的药品级节旋藻蛋白制备方法为其广泛应用提供基础。

附图说明书

图1为本发明实施例提供的药品级节旋藻蛋白制备方法流程图。

图2为本发明实施例提供制备所得药品级节旋藻蛋白的吸收光谱图。

具体实施方式

本发明药品级节旋藻蛋白制备方法步骤包括，参见图1：

步骤1，将市售的藻粉加入到PBS中，搅拌均匀；

步骤2，将浸泡好的藻液离心，并取上清液；

步骤3，把得到的上清液进行超滤浓缩，得粗提浓缩液；

步骤4，向得到的粗提浓缩液中加入甲壳胺，并用氢氧化钠溶液调节pH，搅拌均匀，搅拌得混合物；

步骤5，将混合物离心，取上清；

步骤6，上清液中加入去离子水，超滤置换钠离子后，得到纯化浓缩液；