[发明专利]一种中压高聚物反相色谱分离纯化表没食子儿茶素没食子酸酯的方法

说明书

技术领域

本发明涉及儿茶素的分离提纯方法，尤其涉及一种中压高聚物反相色谱分离纯化表没食子儿茶素没食子酸酯的方法。

背景技术

表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是茶多酚中最有效的活性成分，属于儿茶素，是儿茶素中含量最高的组分，具有强抗氧化性，在医药保健上具有抗肿瘤、抗衰老、降血脂、防止动脉粥样硬化、增强免疫等功能作用；在食品工业上可作抗氧化、抑菌、保鲜、祛臭剂；在日化产品上作特殊功能的保质剂、护肤剂。因此其在医药、食品、日化工业中有广泛用途和应用前景。

目前，儿茶素单体的分离纯化方法主要有吸附树脂层析、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱层析、高速逆流色谱、硅胶柱层析和高效液相制备色谱等。儿茶素的分离纯化不乏其他方法，也常常采用两种或多种方法结合。

但在实际应用中不得不考虑溶剂毒性、成本和分离效率的问题。吸附树脂和葡聚糖凝胶层析分离性能较差，需结合HPLC等分离方法；葡聚糖凝胶价格昂贵；高速逆流色谱和高效液相制备色谱制备量小，分离效率低，所需能耗高。黄永东等使用B型三带模拟移动床技术，以C18键合硅胶为固定相，乙醇与水(20∶80，v/v)为流动相，采用Varicol工艺能得到纯度为91.33％的ECG，回收率为91.41％[黄永东，江和源，江用文，等.传统SMB、Varicol和Partial-discard工艺分离纯化ECG和EGCG的比较研究[J].茶叶科学，2011，31(3)：201-210]，但上述两种方法分别存在C18键合硅胶价格昂贵，有机溶剂用量大，分离平台(逆流色谱仪，移动床)装载量小等缺点。

这些不足制约了其在儿茶素分离中的应用。因此，需要一种分离性能更好、分离效率更高、成本更低的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种分离纯化表没食子儿茶素没食子酸酯的方法，该方法分离效率高、分离成本低且分离过程不使用毒性有机溶剂。

为实现上述目的，本发明采取如下技术方案：采用一定浓度的经酸化的乙醇水溶液作为流动相溶解茶多酚原料，微滤膜过滤后上CCTRI-1单分散高聚物反相色谱柱，该色谱柱适用的pH值变化范围大，化学稳定性好，极易清洗，且再生容易，流动相洗脱后的馏分分段收集，纳滤膜浓缩至一定浓度，浓缩物置真空冷冻干燥机干燥可得高纯度儿茶素单体EGCG产品。具体包括如下步骤：

(1)将乙醇水溶液用有机酸进行酸化，得到酸化的乙醇水溶液；

(2)酸化的乙醇水溶液作为流动相溶解茶多酚原料，得到混合溶液；

(3)将步骤(2)得到的混合溶液经孔径小于1.0μm的微滤膜过滤；

(4)将步骤(3)所得滤液经超声脱气，静置；

(5)利用CCTRI-1单分散高聚物反相色谱柱对步骤(4)得到的滤液进行色谱分离；

(6)色谱分离后，EGCG含量低于97％的馏分重新进行步骤(5)，EGCG含量高于97％的馏分经纳滤膜浓缩至质量浓度为6％～20％；

(7)将步骤(6)得到的浓缩物进行冷冻干燥。

作为优选，所述的茶多酚原料中EGCG的含量不低于40％。

茶多酚易溶于温水或含水乙醇中，且茶多酚在弱酸性条件下稳定，因此，本发明选用经酸化的乙醇水溶液作为流动相，乙醇的化学稳定性好，不与茶多酚发生化学反应，且粘度较低，利于色谱分离，作为优选，所述酸化的乙醇水溶液中乙醇的质量浓度为15％～65％。

作为优选，用于酸化乙醇的有机酸为柠檬酸、酒石酸、苹果酸、抗坏血酸中的一种或任意几种任意比例的混合物，这些有机酸不与茶多酚中的成分发生反应，保证了茶多酚的稳定性。

作为优选，所述酸化的乙醇水溶液的pH值为3.0～5.0。

兼顾茶多酚的溶解性及色谱分离的能力，所述步骤(2)中混合溶液中茶多酚原料的质量浓度为15％～40％。

高聚物色谱填料适用的pH值变化范围很宽，在较宽的pH值范围内可保持较好的化学稳定，且表面疏水，适合于生物分子的反相分离，因此，本发明选用CCTRI-1单分散高聚物反相色谱对茶多酚中表没食子儿茶素没食子酸酯的分离提纯，该色谱柱极易清洗、再生容易、价格便宜、使用寿命长、极具成本优势、便于工业化连续生产。