[发明专利]一种水体中微囊藻毒素MC-LR的测定方法

权利要求书

1.一种水体中微囊藻毒素MC-LR的测定方法，其特征在于利用GF/C玻璃纤维滤纸过滤待测水样中的藻细胞，用C18硅胶为填料的固相萃取柱SPE柱分离纯化过滤后的待测水样，并用高效液相反相色谱系统进行测定其出峰面积，然后通过预先获得的不同浓度的微囊藻毒素MC-LR标准品所对应的出峰面积的标准曲线求出待测水样中微囊藻毒素MC-LR的含量。

2.如权利要求1所述的一种水体中微囊藻毒素MC-LR的测定方法，其特征在于所述的GF/C玻璃纤维滤纸的规格为1.2μm。

3.如权利要求1所述的一种水体中微囊藻毒素MC-LR的测定方法，其特征在于所述的SPE柱为固相萃取小柱，柱管容量6mL。

4.如权利要求1、2或3所述的一种水体中微囊藻毒素MC-LR的测定方法，其特征在于具体包括如下步骤：

(1)、水样的预处理

将5-10mL待测水样经过GF/C玻璃纤维滤纸过滤，收集过滤后的水样待用；

(2)、固相萃取柱SPE柱的活化与微囊藻毒素MC-LR的萃取

固相萃取柱SPE柱填料为C18硅胶，每个样品柱的填料为500mg，固相萃取柱SPE柱先用5mL甲醇活化，并用10mL的Milli-Q水调节；

将步骤(1)的过滤后的待测水样,用上述活化后的SPE柱萃取，过滤后的待测水样以10mL/min的速度进SPE萃取柱，保留分离物,其他干扰物通过吸附剂，所得的分离物用5mL20%的甲醇冲洗1次；

经20%甲醇冲洗后的分离物用3mL的纯甲醇洗脱，洗脱液即为待测水样中MC-LR提取物，控制温度为45℃用氮吹至干，溶于200μL色谱纯甲醇，于-20℃保存；

(3)、微囊藻毒素MC-LR标准曲线的绘制

取MC-LR标准样品，用色谱纯甲醇配成不同浓度的MC-LR标准品甲醇溶液，用HPLC反相色谱系统测定其不同浓度MC-LR标准品甲醇溶液对应的出峰时间在6min的峰面积，然后以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制不同浓度的微囊藻毒素MC-LR标准品所对应的出峰面积，得到不同浓度的微囊藻毒素MC-LR标准品所对应的出峰面积的标准曲线；

(4)、水样中MC-LR的高效液相色谱HPLC测定

取步骤（2）处理好的待测水样中MC-LR提取物用色谱纯甲醇定容到1mL，得到待测水样中MC-LR提取物甲醇溶液，用HPLC反相色谱系统测定，然后根据步骤（3）所得的不同浓度的微囊藻毒素MC-LR标准品所对应的出峰面积的标准曲线求出其对应的MC-LR浓度值，即为待测水样浓缩5-10倍后的MC-LR浓度值。

5.如权利要求4所述的一种水体中微囊藻毒素MC-LR的测定方法，其特征在于所述的HPLC反相色谱系统型号为LC-2000，日本JASCO公司生产，所用色谱柱为大连伊利特柱Hypersil ODS 25μm，色谱柱尺寸为4.6×250mm；

测定条件：流动相为甲醇：水的体积比为60/40，并用三氟乙酸调pH为3.2，流速为0.8mL/min，柱温保持在25℃，紫外检测波长238nm，进样量为10μL。