[发明专利]鸡-γ-干扰素基因序列，其重组工程菌及应用

权利要求书

1.一种人工合成的鸡干扰素基因YEChIFNG，其核苷酸序列如SEQ ID NO2所示。

2.一种重组表达载体，具有权利要求1所述的人工合成的鸡干扰素基因YEChIFNG，其骨架载体为pYES2/CT。

3.一种重组工程菌，具有权利要求1所述的人工合成的鸡干扰素基因YEChIFNG，所述受体菌为酿酒酵母菌株INVSc1。

4.权利要求3所述的重组工程菌生产药用蛋白鸡干扰素的方法，包括如下步骤：

（1）、酵母菌的培养：保种的重组工程菌接种于SC选择培养基上，于30℃，200r/min过夜震荡培养；

（2）、酵母菌的诱导表达培养：当过夜培养的新鲜菌液OD₆₀₀=0.3-0.5时，离心收集菌体并用含半乳糖的液体诱导培养基重悬，并于30℃、200r/min振荡培养。

5.根据权利要求4所述的方法，所述步骤（2）的培养条件为：诱导12h，重组菌液发酵pH值为3.8-4.0，2.5%的半乳糖浓度。

6.根据权利要求4所述的方法，所述步骤还包括保种的重组工程菌的制备方法，将重组工程菌在YPD筛选培养基培养，菌落PCR筛选，挑取阳性克隆单菌落，于SC选择培养基中30℃振荡过夜培养保种。

7.根据权利要求6所述的方法，所述SC选择培养基为：0.8%Ura缺陷培养基粉+2%葡萄糖；所述YPD筛选培养基为：2%胰蛋白胨+1%酵母提取物+2%葡萄糖+60mg/l Amp；所述诱导培养基为0.8%Ura缺陷培养基粉+2%半乳糖+1%棉子糖或者2%葡萄糖。

8.根据权利要求4所述的方法，所述步骤（2）的酵母菌培养到对数生长期时，取出转速1500r/min离心5min收集菌体，灭菌水重悬菌体细胞之后，10000 r/min离心30 s，得菌体细胞用裂解缓冲液重悬。