[发明专利]甾醇基色谱固定相的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于液相色谱技术领域，具体涉及一种甾醇基色谱固定相的制备方法。

背景技术

高效液相色谱法(HPLC)是当代色谱技术最主要的组成部分，是近代分析化学发展最快、应用最广的分离分析技术，它在化学、医药、食品、环保、生化及工业制备等众多领域发挥越来越重要的作用。在高效液相色谱系统中，固定相居于重要地位，高选择性色谱固定相的研制是现代分析化学的前沿研究领域，新型液相色谱固定相的开发具有十分重要的科研意义与应用价值。。

甾醇是一类由3个己烷环及一个环戊烷稠合而成的环戊烷多氢菲衍生物，它是广泛存在于生物体内的一类重要天然活性物质，按其原料来源可分为动物性甾醇、植物性甾醇和菌类甾醇等三大类。动物性甾醇以胆固醇为主，植物性甾醇主要为谷甾醇、豆甾醇和菜油甾醇等。它们不仅是构成生物膜的重要组成部分，而且还是合成许多激素的前体物质。

甾醇的分子结构不仅赋予其极强疏水性，而且还使其具有独特的空间结构与液晶性能，正因为如此，近年来以甾类化合物为配体的色谱分离材料引起了广大色谱分析工作者的极大兴趣，开发了多种甾醇基色谱固定相，并将其广泛用于正相色谱分离甾类激素化合物、反相色谱分离疏水性化合物如稠环芳烃类化合物、富勒烯、萘乙胺光学异构体等。该类固定相不仅具有与ODS键合固定相相类似的疏水作用特点，而且随着分离温度的变化呈现一定的液晶性能，在高水相体系条件下不会发生固定相“坍塌“而导致溶质保留降低的现象，另外，一些电负性元素(如O、N)的引入，使得该固定相由于某些极性基团的出现(如醚、甲酸酯、酯)而呈现一定的极性特点。

目前报道的甾醇类固定相制备方法主要有两种方法：一种方法是先将硅胶与三乙氧基硅烷反应生成硅氢化硅胶，然后在Karstedt催化剂作用下通过硅氢加成反应将胆固醇不饱和酸酯固定在硅胶表面(J.J.Pesek,M.T.Matyska,E.J.Williamsen,R.Tam,Chromatographia,41(1995)301-310)，该类固定相已被美国MicroSolv公司商品化；另一种方法操作相对简便——通过甾醇氯甲酸酯与氨丙基硅烷改性的硅胶直接键合而成(B.Buszewski,M.Jezierska,O.G. Barbara.Materials Chemistry and Physics,72(2001)30–41)。但两种方法都需要首先将甾醇进行改性，大幅增加了原料成本，而且：第一种方法的反应条件还较为严格，且催化剂非常昂贵；第二种方法所使用的配体原料甾醇氯甲酸酯除成本相对未改性的甾醇较高外，性质还较活泼，对空气湿度比较敏感。

发明内容

本发明的目的在于提供一种甾醇基色谱固定相制备方法。该固定相制备方法简单，成本低廉，用途广泛。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种甾醇基色谱固定相的制备方法，所述甾醇基色谱固定相由偶联剂分别与微球形的无机基质填料和甾醇类化合物反应制得，所述偶联剂为具有如下的结构通式的异氰酸烷基硅烷：

其中，X为甲基或乙基，m=3～8。

上述方案中，所述偶联剂先与微球形的无机基质填料反应，然后再与甾醇类化合物反应，具体步骤如下：

1)在溶有异氰酸烷基硅烷偶联剂的无水甲苯溶液中加入微球形无机基质填料，惰性氛围下加入三乙胺作为催化剂，100～160℃下回流反应8～24小时，经冷却、抽滤、洗涤、真空干燥，得异氰酸烷基硅烷偶联剂键合硅胶；

2)然后，将异氰酸烷基硅烷偶联剂键合固定相分散于无水甲苯中，惰性氛围下加入甾醇类化合物与吡啶，搅拌溶解后于50～100℃下反应8～24小时，经冷却、抽滤、洗涤、干燥，即得甾醇基色谱固定相。

上述方案中，所述偶联剂先与甾醇类化合物反应，然后再与微球形的无机基质填料反应，具体步骤如下：

1)在溶有甾醇类化合物的无水甲苯溶液中逐滴加入异氰酸烷基硅烷偶联剂，惰性氛围下加入吡啶，在50～100℃下搅拌反应8～24小时；

2)然后，往反应体系中加入微球形无机基质材料，惰性氛围下加入三乙胺作为催化剂，100～160℃下回流反应8～24小时，经冷却、抽滤、洗涤、真空干燥，即得甾醇基色谱固定相。

上述方案中，所述甾醇类化合物包括但不限于胆固醇(cholesterol)、谷甾醇(sitosterol)、豆甾醇(stigmasterol)、菜油甾醇(campesterol)、真菌甾醇(fungisterol)。